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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小女子求助各位大侠
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xintutiao

金虫 (小有名气)

[求助] 小女子求助各位大侠

各位大侠 请帮帮小女子 如何从环境样品（污泥 土壤 沉积物）中如何提取总蛋白质 提出蛋白质如果想用hplc检测的话 需要做哪些上样前的预处理。小女子没有做蛋白的任何背景 实验室以前也没有做过 请各位大侠帮帮忙 小女子不胜感激
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1楼 2012-04-19 15:54:37
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foxmygod
2楼2012-04-22 02:22:26
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xintutiao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by foxmygod at 2012-04-22 02:22:26:

希望前辈多多指点 不要只嘲笑我嘛
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3楼2012-04-23 17:56:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先离心、过滤，充分去除非溶解性的物质，取上清液，然后盐析去沉淀。而后根据需要进行分离提纯。
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4楼2012-04-24 00:21:56
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

过滤后取上清液，还可以超滤、减压蒸馏获得游离蛋白质。如果你要取得污泥里的生物的蛋白质，那么首先要提纯出微小的生物，比如细菌，原生动物，病毒等，要用不同的过滤装置收集，然后对不同的微生物加以粉碎后收集蛋白质，并去掉其他生物大分子。
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5楼2012-04-24 00:29:16
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sl35537417

木虫 (正式写手)
这个貌似 难度有点大啊
你可以悬浮以后取上清涂平板 大规模长起来以后再提蛋白
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6楼2012-04-24 04:31:48
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迷情八月

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉，土壤中的蛋白质含量非常低，所以你要保证你的取样量要大，这个不好估计，你可以参考下文献，土壤中蛋白的含量比例。然后常规的溶解，离心，杂质去除之后，再用常规的蛋白提取方法，硫酸铵沉淀，透析，冻干。
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7楼2012-04-24 11:44:19
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windbellwang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

液氮冷冻研磨（或者反复冻融） 然后加DNA提取试剂盒的试剂就可以~
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8楼2012-05-07 18:53:00
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