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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？

我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？我看分子克隆书上说用聚乙二醇沉淀法。大家谁浓缩过质粒DNA呀？具体的步骤是啥？我想把大概100ul质粒浓缩为10ul-20ul。
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好孩子！
1楼 2012-04-14 21:42:18
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励应助 2012-04-17 19:29:12
zhang8826857: 金币+7, ★有帮助 2012-04-17 19:33:35
引用回帖:
13楼: Originally posted by beautybanana at 2012-04-17 00:14:08:
http://cshprotocols.cshlp.org/content/2006/1/pdb.prot3907.short
提供你一个文献~不懂的再说啊

如果有条件的话可以这么做：材料：PEG6000/PEG8000，NaCl.使得你要纯化或是浓缩的体系终浓度为：PEG8000：6%-8%（W/V，就是100mL水中有6gPEG）NaCl:0.5M大概就差不多，混匀静置10-20min，然后离心12000rpm 5-10min大概就可以了吧，具体的我没有研究，据我的推测应该是可以的，去掉上清，如果能看得见沉淀的话就好办了，75%的乙醇漂洗2次，然后加TE溶解就达到浓缩的目的了，一般会使用羧基磁性微球进行沉淀而不需要离心的，回收率会达到90%以上，你们大概没有这个条件，就用离心的方法吧，自己试试。
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14楼2012-04-17 18:16:20
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
浓缩没试过，提质粒倒是很多

你就当质粒再弄一边呗，相当于加完S III后边那一步，
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小木虫之有关部门负责人
2楼2012-04-14 21:47:06
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dilelton

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-04-17 19:30:09
DNA的提取中浓缩用的是无水乙醇
应该也可以用于浓缩质粒DNA吧
lz试试！
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以诚感人者，人亦诚而应。
3楼2012-04-14 22:06:12
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-04-17 19:30:17
《分子克隆》上面碱裂解法提质粒那一部分有说到乙醇沉淀DNA，你参照那里的做就好啦。
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4楼2012-04-14 23:51:03
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