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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

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[求助] 我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？

我想浓缩质粒DNA，能用乙醇沉淀法吗？我看分子克隆书上说用聚乙二醇沉淀法。大家谁浓缩过质粒DNA呀？具体的步骤是啥？我想把大概100ul质粒浓缩为10ul-20ul。

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好孩子！

1楼 2012-04-14 21:42:18

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beautybanana

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励应助 2012-04-17 19:29:12
zhang8826857: 金币+7, ★有帮助 2012-04-17 19:33:35

引用回帖:

13楼: Originally posted by beautybanana at 2012-04-17 00:14:08:
http://cshprotocols.cshlp.org/content/2006/1/pdb.prot3907.short
提供你一个文献~不懂的再说啊

如果有条件的话可以这么做：材料：PEG6000/PEG8000，NaCl.使得你要纯化或是浓缩的体系终浓度为：PEG8000：6%-8%（W/V，就是100mL水中有6gPEG）NaCl:0.5M大概就差不多，混匀静置10-20min，然后离心12000rpm 5-10min大概就可以了吧，具体的我没有研究，据我的推测应该是可以的，去掉上清，如果能看得见沉淀的话就好办了，75%的乙醇漂洗2次，然后加TE溶解就达到浓缩的目的了，一般会使用羧基磁性微球进行沉淀而不需要离心的，回收率会达到90%以上，你们大概没有这个条件，就用离心的方法吧，自己试试。