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uuu555000

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[交流] 做了一周的RAPD,几乎没p出条带,为啥?

用SDS-CTAB法提尖孢镰刀菌DNA,做RAPD,一周试了20条随机引物,有一条引物p出条带,相同条件做重复,就没条带出现,咋回事啊?
25微升扩增体系;10倍缓冲液2.5微升,dNTPs 2微升,Taq酶 0.125微升,引物 模板DNA各1微升,ddH2O 18.375微升,
扩增程序:
95度 2min,37度 1min,72度 2min,1个循环
94度1min,36度 1min,72度 2min,39个循环
94度1敏, 36度1min,72度 10min,1个循环,
谁能给个解释啊
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menglinyan

新虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流。 2012-04-18 18:08:58
引用回帖:
6楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-04-16 18:13:04:
没啊  郁闷死了

楼主, 你找你们那边的师兄师姐帮你看一下,我昨天找了个做过这个的师兄指点了下。原来我的MIX没有按比例加,我跑的15微升体系,一直加的是6微升,后来加7.5微升,换了一次性的PCR管后就出来了,只是不知道稳定不。还有变性时间我也从3min延长到5min了
7楼2012-04-18 16:03:37
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menglinyan

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
烦死了 我也没条带,半个月了
3楼2012-04-15 14:21:09
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menglinyan

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这两天做出来了吗,我已经降低了模板浓度了,提高了退货温度,还是没有条带,怎么会这样呢。。。哎 已经快要崩溃了
5楼2012-04-16 17:27:42
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)


引用回帖:
5楼: Originally posted by menglinyan at 2012-04-16 17:27:42:
你这两天做出来了吗,我已经降低了模板浓度了,提高了退货温度,还是没有条带,怎么会这样呢。。。哎 已经快要崩溃了

没啊  郁闷死了
6楼2012-04-16 18:13:04
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