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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做了一周的RAPD，几乎没p出条带，为啥？
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 做了一周的RAPD，几乎没p出条带，为啥？

用SDS-CTAB法提尖孢镰刀菌DNA，做RAPD，一周试了20条随机引物，有一条引物p出条带，相同条件做重复，就没条带出现，咋回事啊？
25微升扩增体系；10倍缓冲液2.5微升，dNTPs 2微升，Taq酶 0.125微升，引物 模板DNA各1微升，ddH2O 18.375微升，
扩增程序：
95度 2min，37度 1min，72度 2min，1个循环
94度1min，36度 1min，72度 2min，39个循环
94度1敏， 36度1min，72度 10min，1个循环，
谁能给个解释啊
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1楼 2012-04-14 18:39:07
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menglinyan

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你这两天做出来了吗，我已经降低了模板浓度了，提高了退货温度，还是没有条带，怎么会这样呢。。。哎 已经快要崩溃了
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5楼2012-04-16 17:27:42
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menglinyan

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
烦死了 我也没条带，半个月了
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3楼2012-04-15 14:21:09
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by menglinyan at 2012-04-16 17:27:42:
你这两天做出来了吗，我已经降低了模板浓度了，提高了退货温度，还是没有条带，怎么会这样呢。。。哎 已经快要崩溃了

没啊  郁闷死了
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6楼2012-04-16 18:13:04
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menglinyan

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流。 2012-04-18 18:08:58
引用回帖:
6楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-04-16 18:13:04:
没啊  郁闷死了

楼主， 你找你们那边的师兄师姐帮你看一下，我昨天找了个做过这个的师兄指点了下。原来我的MIX没有按比例加，我跑的15微升体系，一直加的是6微升，后来加7.5微升，换了一次性的PCR管后就出来了，只是不知道稳定不。还有变性时间我也从3min延长到5min了
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7楼2012-04-18 16:03:37
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