24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4505)
>文献求助 (294)
>导师招生 (258)
>论文投稿 (241)
>博后之家 (232)
>虫友互识 (161)
>硕博家园 (88)
>有机交流 (81)
>考博 (77)
>招聘信息布告栏 (49)
>学术会议 (43)
>休闲灌水 (31)
>基金申请 (21)
>找工作 (20)
>教师之家 (19)
>考研 (17)

返回列表

本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hc1027

木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1414.3
散金: 107
红花: 4
帖子: 903
在线: 311.3小时
虫号: 726621
注册: 2009-03-19
专业: 环境微生物学

[求助] 【求助】请教cDNA-AFLP 实验的相关问题，请大家帮忙看看，谢谢

打算做cDNA-AFLP 差异表达，想请教几个问题：
1、选择性扩增的时候用33P标记的引物是为何呢？这个标记的引物贵吗，价格如何？
2、内切酶一般买什么公司的比较好呢？我做真菌的，不知道用哪种内切酶比较好？
3、因为是第一次做，身边没人做过，请问如何判断每步的效果呢？以及每步的注意事项有什么？
①cDNA的准备
②酶切
③连接
④预扩增
⑤选择性扩增
⑥电泳及切胶。

希望有经验的人帮忙指点，不甚感激。

[ Last edited by hc1027 on 2012-4-14 at 15:47 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有184人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复

1楼 2012-04-14 15:46:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hc1027

木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1414.3
散金: 107
红花: 4
帖子: 903
在线: 311.3小时
虫号: 726621
注册: 2009-03-19
专业: 环境微生物学

西瓜: 回帖置顶 2012-05-09 18:50:58

引用回帖:

10楼: Originally posted by xiaoxiong520 at 2012-05-08 10:14:06:
内切酶NEB的比Fermentas的好些，我们用的是Fermentas的；
每步的检测：
①cDNA的准备：RNA的质量很重要，是关键，合成第一链cDNA，之后合成第二链cDNA；检测反转录结果的话：取合成的第二链cDNA产物做PCR扩增内 ...

我也是用的fermentas的，我是做真菌的。
买的EcoRI 和 MseI （不是快酶），37度3h，65度3h
感觉酶切还是不够彻底。
请问你是怎么切的。

连接酶也是fermentas的，说明上好像是22度只要10min，我连接了1h，不知道够了没？

1%琼脂糖，预扩什么都没有，没条带没弥散。
预扩产物我没梯度稀释，直接稀释50倍做选扩，选扩2%琼脂糖电泳倒是出来很多条带，部分由弥散。
不清楚为什么预扩什么都没有，选扩是这样的效果？