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MR_wang

金虫 (小有名气)

[求助] 枯草芽孢杆菌中试染菌

做枯草芽孢杆菌中试,小试已验证没有问题,10L发酵罐芽孢120亿左右,2000L中试总是染菌,菌落形态明显不同,每次都在10时开始出现杂菌,12h以后全是杂菌,显微镜看细菌很长,比正常枯草要长5倍以上,16s无法鉴定,且能形成芽孢,发酵罐更换空气滤芯无效,使用的是四氟乙烯材质的滤芯,发酵罐使用时间接近十年,现在怀疑是发酵罐或空气系统问题,请高人指点解决染菌问题!

[ Last edited by MR_wang on 2012-4-9 at 22:08 ]
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_wang: 金币+3, 有帮助, 感谢 2012-04-12 20:20:28
1.根据你描述的现象,感觉应该是培养基灭菌不彻底造成的染菌,提高灭菌温度或延长灭菌时间不知道对你的培养基成分是否有破坏。你的培养基中是否有玉米浆(或玉米浆干粉)、玉米面等一类的成分,如果有的话就得提高灭菌温度或延长灭菌时间,或者把玉米浆提前灭菌然后再和其它的培养基成分一起灭菌。
2.10L罐与中试罐的结构也有一定的差异,上罐前仔细检查罐内是否有死角,是否有积垢的地方,罐内是清理干净,如果连续污染在上罐前要用2%的液碱85~100度煮罐30~60min,还要空消。
3.培养基灭菌的时候与培养基接触的管道是否都有进蒸汽,如进气管、取样管、罐底出料管等,这些地方灭菌不到位也是一个染菌源。
仅提供简单的建议,希望对你有帮助,祝你成功。
3楼2012-04-10 10:00:47
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ecolibl21

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_wang: 金币+3, 有帮助, 感谢 2012-04-12 20:19:24
1确定你说的杂菌是否是枯草的一种形态。因为做过的大肠杆菌形态也有非常长的类似丝状,但仍然是大肠。
2如果确定是杂菌,检查罐体是否有密封不严之处,多注意死角处;如果怀疑通气系统,多加一级过滤装置尝试下。
3种子罐接种菌密度适当提高,高密度的种子也许会有优势。
4注意补料罐或者补料桶和补料管道阀门是否有不严的地方。
PCR发明人穆利斯的成功表明,想象力推动进步
2楼2012-04-10 09:38:13
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