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人生初见

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1078452
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专业: 植物化学保护

[求助] 通过RT-PCR 获得了一段保守序列接着如何设计RACE引物

如题
我要做的是一个未知基因，依据已知物种的对比设计出了引物，做了RT-PCR获得了大约500bp的片段，现在要获得全长，做RACE。
kit 中说设计3‘和5’引物各为sense 和antisense 引物，我现在又个很纠结的问题，一般测序结果的序列是正链还是负链呢？怎么知道测序结果是从5‘到3’ 还是从3‘到5’呢？然后怎么设计引物？
P.S.
我的电脑装的是win7 32位的，可以装PP5吗？装了个PP6好像不好用

我是RACE新手请教各位大虾！！！

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wangweida2

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1楼 2012-04-09 18:04:12

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z7531242

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2047803
注册: 2012-10-07
专业: 植物学研究的新技术、新方

【答案】应助回帖

★
人生初见: 金币+1, ★有帮助 2013-07-10 05:42:15

現在大部分都是用SMARTer™ RACE cDNA Amplification Kit User Manual 這組方便又快速，方法步驟跟試劑protocal裡面都寫得很清楚。簡單的說...
5'RACE :primer設計在為Reverse
3'RACE: primer設計在為Forward
然後將5'跟3'回?淼男蛄袑Τ梢欢稳L的序列ATG...............TAA (CDS) 之後就看你要做甚麼瞜^^