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蓝轩风

银虫 (小有名气)

[求助] 双抗夹心胶体金法的问题

最近在用夹心法做试纸条，用纯化了稻纵卷叶螟的Vg蛋白，给外面的公司分别做出了鼠单抗和兔多抗。做试纸条时，我标记的是单抗，T线划的是多抗，直接用纯化的Vg蛋白做抗原来检测，可是现在我做的是：用水做稀释液是，阴性和阳性(500ng/ml)都显色。用 PH7.4的PBS稀释，阴性和阳性都不显色。而且抗原做梯度稀释（PBS）时，用高浓度的抗原检测时，金标都跑不上面，沉积在金标垫与NC膜之间（阳性稀释到5ng/ml也不显色）。改了很多条件，都没什么改变，不知有没有高手知道，可能的问题是什么呢？（夹心ELISA没什么问题）
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1楼 2012-04-07 09:19:43
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wfs0620

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
nanopony: 金币+3, 感谢解答。谢谢支持科研经验版 2012-05-03 14:22:37
可能原因：
1. 金标记抗体的成功率问题，是否是有效地金标抗体
2.金稀释液可能需要优化的，跑板上不去，还跟NC膜的孔径密切相关
3.水做稀释液是，阴性和阳性(500ng/ml)都显色，一般是包被抗体特异性和金标记抗体的封闭体系没有做好
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继续加油
2楼2012-05-03 14:20:53
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