24小时热门版块排行榜    

查看: 4321  |  回复: 21

ivyvampire

新虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by beautybanana at 2013-09-22 16:26:18
你要买商业用的稀释液+良好的操作应该可以做到很好的重复性的....

哦哦
11楼2013-09-22 16:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!
12楼2014-06-26 20:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!
13楼2014-06-26 20:05:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 小慈abc at 2014-06-26 20:05:17
你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!...

浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了.
14楼2014-06-26 21:16:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-26 21:16:23
浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了....

我最高浓度用的是0.072ng/ul 曲线就已经成弧形了,10倍稀释后两个梯度也不能用 请问这是为什么呢?
15楼2014-06-27 08:37:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-26 21:16:23
浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了....

还有一个关于您说的稀释液的问题  我试过用水稀释和稀释液稀释两个相同浓度梯度的ct值差很多 稀释液的ct值要大一些 这是为什么呢?
16楼2014-06-27 08:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

你右键点击扩增图, 点设置, 把对数图改成线性图, 可能弧线会变正常的扩增曲线, 试试
17楼2014-06-27 09:13:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小慈abc at 2014-06-27 08:40:16
还有一个关于您说的稀释液的问题  我试过用水稀释和稀释液稀释两个相同浓度梯度的ct值差很多 稀释液的ct值要大一些 这是为什么呢?...

把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下
18楼2014-06-27 09:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-27 09:14:37
把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下...

恩恩 好的 我下星期给您好么 现在不在实验室
19楼2014-06-27 16:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小x001

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-27 09:14:37
把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下...

你好,我也刚开始做rt-pcr这一块,用实时荧光pcr仪做的标准曲线一直不太好,r2最大才达到0.933,这个可以用吗?这个标准曲线做的不好主要和什么有关呢?和引物有关吗?谢谢!
20楼2014-12-04 20:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangzhengnan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 354求调剂 +6 Tyoumou 2026-03-18 9/450 2026-03-21 20:47 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 310求调剂 +3 baibai1314 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:56 by JourneyLucky
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 324求调剂 +5 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 5/250 2026-03-20 22:30 by 促天成
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见