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ivyvampire

新虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by beautybanana at 2013-09-22 16:26:18
你要买商业用的稀释液+良好的操作应该可以做到很好的重复性的....

哦哦
11楼2013-09-22 16:28:36
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小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!
12楼2014-06-26 20:04:58
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小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!
13楼2014-06-26 20:05:17
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beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 小慈abc at 2014-06-26 20:05:17
你好打扰你了 看了你的回复 想问个问题好嘛??做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢 为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小 浓度太高不能用呢? 我看好多都是用2-7次方的呀?谢谢您啦!!!...

浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了.
14楼2014-06-26 21:16:23
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小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-26 21:16:23
浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了....

我最高浓度用的是0.072ng/ul 曲线就已经成弧形了,10倍稀释后两个梯度也不能用 请问这是为什么呢?
15楼2014-06-27 08:37:27
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小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-26 21:16:23
浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了....

还有一个关于您说的稀释液的问题  我试过用水稀释和稀释液稀释两个相同浓度梯度的ct值差很多 稀释液的ct值要大一些 这是为什么呢?
16楼2014-06-27 08:40:16
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beautybanana

木虫 (著名写手)

你右键点击扩增图, 点设置, 把对数图改成线性图, 可能弧线会变正常的扩增曲线, 试试
17楼2014-06-27 09:13:20
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beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小慈abc at 2014-06-27 08:40:16
还有一个关于您说的稀释液的问题  我试过用水稀释和稀释液稀释两个相同浓度梯度的ct值差很多 稀释液的ct值要大一些 这是为什么呢?...

把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下
18楼2014-06-27 09:14:37
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小慈abc

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-27 09:14:37
把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下...

恩恩 好的 我下星期给您好么 现在不在实验室
19楼2014-06-27 16:32:53
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小x001

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-27 09:14:37
把稀释倍数和具体的Ct值列出来, 我帮你分析下...

你好,我也刚开始做rt-pcr这一块,用实时荧光pcr仪做的标准曲线一直不太好,r2最大才达到0.933,这个可以用吗?这个标准曲线做的不好主要和什么有关呢?和引物有关吗?谢谢!
20楼2014-12-04 20:55:58
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