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俊灵

铜虫 (小有名气)

[求助] 不同PH下荧光能量共振转移发生的情况比较,只有一个点没发生FRET,原因是什么?

       我最近在做一个实验,用一种生物材料D检测多巴胺,生物材料D的发射光谱与多巴胺的吸收光谱部分重合,但D与抗坏血酸AA的吸收光谱也有部分重合,抗坏血酸是检测多巴胺最常见的干扰物,我想消除抗坏血酸的干扰,原来想法是利用增大PH值,增加生物材料D与AA的距离,这样荧光共振能量转移就不会发生,做的图如下。

       原来以为随着PH增加,生物材料D和AA间的距离越大,那么达到某一个点后,后面就都是平台,但检测结果显然不是这样,达到PH8.9时,然后又反弹了,又出现一定的荧光共振能量转移。为什么只在PH8.9的时候不会有荧光共振能量转移?大家认为是什么原因呢?

     抗坏血酸的PKa值是4.17和11.6,多巴胺的PKa指是9.17。


生物材料D在加入抗坏血酸AA后,D的荧光强度变化值随PH的变化。
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俊灵

铜虫 (小有名气)

顶一个,这个我问题困扰我很久了,希望大家一起讨论!
2楼2012-04-09 20:44:18
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markar

版主 (知名作家)

光之电首席技术官

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-04-10 08:00:56
会不会是偶然误差
或者pH值本身会影响AA的荧光强度,建议做一个空白参照,即只有AA,同时改变其pH值观察pH值对AA荧光强度的影响,逐步排除干扰因素!
宠辱不惊,闲看庭前花开花落;去留无意,漫随天外云卷云舒!
3楼2012-04-09 22:29:33
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