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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Pushing2012

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


[交流] 蛋白表达

最近表达了个蛋白,用的Pet30做载体,目标蛋白41kDa,IPTG诱导后SDS-PAGE检测在36kDa出现明显新的条带,空白菌和表达菌都在41kda有条带,镍柱纯化后得到的蛋白在41kDa,这个让我无法理解,为什么跑胶时新出现的蛋白在36kDa,而纯化出的蛋白在41kDa。 做酶活测试没有活性,请问在做酶活测试时有没有什么注意事项!请高人赐教!
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churchill87426

兑换贵宾

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Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
LZ的36KDa和41KDa的蛋白位置差别大么?纯化后的蛋白有没有Western检测下是不是目标蛋白?是变性纯化还是Native纯化?纯化过程尽量都在4度操作。
5楼2012-03-31 18:02:57
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whb21

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
这个确实有点诡异,建议你做个ELISA看看表达出来的蛋白是不是你要的,
2楼2012-03-31 10:08:30
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Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
表达的蛋白是在上清吗?
3楼2012-03-31 14:05:00
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sunwei57

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
全程低温操作,建议重新跑胶检测 你的蛋白
4楼2012-03-31 16:17:16
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Rosy_yidun13楼
2012-04-01 10:13   回复  
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币-10, 广告 2012-04-01 18:06:42
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
Rosy_yidun14楼
2012-04-01 10:14   回复  
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
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