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26264716

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ningxi123456 at 2012-03-26 19:04:15
我用过16度诱导14小时,没有诱导出来的呢...

我的蛋白37度能诱导出来,16-18度就不行了,,烦躁中呢。。。还有什么办法呢。。低iptg???
苦,才是人生
11楼2013-05-07 13:27:04
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appletree-

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xiaogang0301 at 2012-04-13 10:53:59
你现在知道形成包涵体 可以给他进行超声破碎或者用尿素处理 然后在进行纯化 去尿素什么的都可以 这样做要保证你的蛋白表达量高

我也遇到过这种问题,换了好多载体都不管用。最近再考虑包涵体复性
12楼2013-05-18 11:38:43
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edoz1986

新虫 (小有名气)

可以15度过夜摇。
也可以用pcold系列载体,低温表达。
也可以给你的蛋白加入可溶性大标签,gst mbp等。
也可以用orb的感受态,它易于形成链内二硫键。
13楼2013-05-23 10:00:47
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yxliu

金虫 (小有名气)

大宁子师姐还做过这么高端的啊

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-01-04 12:35:33
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ningxi123456

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by yxliu at 2014-01-04 12:35:33
大宁子师姐还做过这么高端的啊

大香子师弟,好好学习学习啊
15楼2014-01-05 08:33:01
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哈姆_雷特

铜虫 (初入文坛)

低温诱导或者对菌体进行破包处理,再进行变复性
我是干发酵的
16楼2014-07-22 16:09:25
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

降低温度,增加诱导时间,IPTG的浓度也适当降低一些

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
17楼2014-07-23 23:36:33
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旺旺涵GD

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by imyting at 2012-03-26 17:43:29
我也遇到过这种情况,的确很难解决,我觉得可以从以下几点尝试:
1.降低温度,最容易想到的方法,文献中有很多都是这么做的,但是有时候效果并不是很明显,最多可降至8℃;
2.分析自己序列的疏水氨基酸含量,并进 ...

你好我想问一下换一个载体是不是就不会形成包涵体了。蛋白新手,求指教
18楼2015-07-15 12:59:18
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15060040446

新虫 (初入文坛)

您好,我现在也遇到这种情况,提完蛋白离心后,SDSS-PAGE分析,发现诱导出来的是在沉淀,而不是上清液,请赐教

发自小木虫IOS客户端
19楼2017-08-20 19:52:46
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loveqingzhi

铜虫 (正式写手)

20楼2018-03-11 00:08:08
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