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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
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26264716

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ningxi123456 at 2012-03-26 19:04:15
我用过16度诱导14小时，没有诱导出来的呢...

我的蛋白37度能诱导出来，16-18度就不行了，，烦躁中呢。。。还有什么办法呢。。低iptg？？？
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苦，才是人生
11楼2013-05-07 13:27:04
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appletree-

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xiaogang0301 at 2012-04-13 10:53:59
你现在知道形成包涵体 可以给他进行超声破碎或者用尿素处理 然后在进行纯化 去尿素什么的都可以 这样做要保证你的蛋白表达量高

我也遇到过这种问题，换了好多载体都不管用。最近再考虑包涵体复性
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12楼2013-05-18 11:38:43
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edoz1986

新虫 (小有名气)
可以15度过夜摇。
也可以用pcold系列载体，低温表达。
也可以给你的蛋白加入可溶性大标签，gst mbp等。
也可以用orb的感受态，它易于形成链内二硫键。
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13楼2013-05-23 10:00:47
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yxliu

金虫 (小有名气)
大宁子师姐还做过这么高端的啊

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14楼2014-01-04 12:35:33
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ningxi123456

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yxliu at 2014-01-04 12:35:33
大宁子师姐还做过这么高端的啊

大香子师弟，好好学习学习啊
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15楼2014-01-05 08:33:01
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哈姆_雷特

铜虫 (初入文坛)
低温诱导或者对菌体进行破包处理，再进行变复性
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我是干发酵的
16楼2014-07-22 16:09:25
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
降低温度，增加诱导时间，IPTG的浓度也适当降低一些

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天道酬勤
17楼2014-07-23 23:36:33
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旺旺涵GD

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by imyting at 2012-03-26 17:43:29
我也遇到过这种情况，的确很难解决，我觉得可以从以下几点尝试：
1.降低温度，最容易想到的方法，文献中有很多都是这么做的，但是有时候效果并不是很明显，最多可降至8℃；
2.分析自己序列的疏水氨基酸含量，并进 ...

你好我想问一下换一个载体是不是就不会形成包涵体了。蛋白新手，求指教
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18楼2015-07-15 12:59:18
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15060040446

新虫 (初入文坛)
您好，我现在也遇到这种情况，提完蛋白离心后，SDSS-PAGE分析，发现诱导出来的是在沉淀，而不是上清液，请赐教

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19楼2017-08-20 19:52:46
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loveqingzhi

铜虫 (正式写手)
变性复性

发自小木虫IOS客户端
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20楼2018-03-11 00:08:08
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