| 查看: 7729 | 回复: 22 | ||||||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
ningxi123456金虫 (小有名气)
|
[求助]
原核表达形成了包涵体怎么办啊？
|
|||||
|
我的目的基因是水稻中克隆出来的，连到PET24上做原核表达，表达出来了，大小也对，但是在纯化跑SDS-PAGE电泳后发现它在沉淀里面，形成了包涵体。该怎么办啊？原核表达我都做了半年了，现在形成了包涵体，更是郁闷，各位大侠，谁能帮我解决下啊，感激不尽~！！！ 我的目的蛋白大概38Da，按1:100加入500ml的LB培养基中摇菌至OD600=0.6，加入0.7mM的IPTG，37°C诱导三个小时。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 核酸生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 | 实验求助 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 低温诱导蛋白表达时用多少度合适？
已经有16人回复
- 原核表达蛋白纯化
已经有32人回复
- 原核表达蛋白复性的具体方案
已经有14人回复
- 原核上清表达条件
已经有6人回复
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 原核表达做不出来了！
已经有15人回复
- 关于原核表达结果的分析及原因
已经有9人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 原核表达His-tag怎么去除
已经有3人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？
已经有7人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- 浇注料养护后胚体开裂，为什么？？
已经有5人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教关于诱导表达产生包涵体问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】原核表达，预测的信号肽序列是否包括
已经有7人回复
- 【求助/交流】原核表达去载体序列被翻译后该如何去掉
已经有5人回复
- 【求助】拉伸样条与万能试验机的夹具相对滑移怎么办？
已经有11人回复
- [求助]原核表达如何减少包涵体
已经有23人回复
xiaogang0301
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 190.5
- 帖子: 9
- 在线: 2.1小时
- 虫号: 1204171
- 注册: 2011-02-16
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2012-04-13 10:53:59
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2012-03-26 17:07:53
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10218.2
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 805
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ningxi123456: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-26 19:04:56
amisking: 回帖置顶 2012-03-26 19:55:20
amisking: MolEPI+1, 鼓励新虫发帖交流！ 2012-03-26 19:55:26
感谢参与，应助指数 +1
ningxi123456: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-26 19:04:56
amisking: 回帖置顶 2012-03-26 19:55:20
amisking: MolEPI+1, 鼓励新虫发帖交流！ 2012-03-26 19:55:26
|
我也遇到过这种情况，的确很难解决，我觉得可以从以下几点尝试： 1.降低温度，最容易想到的方法，文献中有很多都是这么做的，但是有时候效果并不是很明显，最多可降至8℃； 2.分析自己序列的疏水氨基酸含量，并进行信号肽预测，必要时可将信号肽切除，因为一般来说信号肽中疏水氨基酸多，会影响蛋白质可溶； 3.可以做一个OD值的梯度，OD0.4-0.6是分子克隆提供的条件，很多文献也这么做，但是这个条件不适合溶解性低的蛋白，OD1.0时效果一般比较好，你可以试试别的OD值。 4.IPTG的浓度影响不太大，但是我试过将IPTG浓度降低十倍，一点儿也不影响效果，IPTG价格还是比较贵的，能省就省吧。 5.如果上述都不行，就只剩最后一种方法了，换载体，对于研究生来说周期应该也不长，毕竟都做过这个，例如PET-30a之类的。 |
3楼2012-03-26 17:43:29
ningxi123456
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 534.5
- 红花: 3
- 帖子: 65
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 1004286
- 注册: 2010-04-23
- 性别: MM
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
4楼2012-03-26 19:04:15
