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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
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ningxi123456

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达形成了包涵体怎么办啊？

我的目的基因是水稻中克隆出来的，连到PET24上做原核表达，表达出来了，大小也对，但是在纯化跑SDS-PAGE电泳后发现它在沉淀里面，形成了包涵体。该怎么办啊？原核表达我都做了半年了，现在形成了包涵体，更是郁闷，各位大侠，谁能帮我解决下啊，感激不尽~！！！
      我的目的蛋白大概38Da，按1:100加入500ml的LB培养基中摇菌至OD600=0.6，加入0.7mM的IPTG，37°C诱导三个小时。
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1楼 2012-03-26 15:53:54
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哈姆_雷特

铜虫 (初入文坛)
低温诱导或者对菌体进行破包处理，再进行变复性
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我是干发酵的
16楼2014-07-22 16:09:25
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ningxi123456: 金币+2 2012-04-25 20:30:47
尝试低温诱导，降低蛋白的量可以有效抑制包涵体的形成
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-03-26 17:07:53
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ningxi123456: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-26 19:04:56
amisking: 回帖置顶 2012-03-26 19:55:20
amisking: MolEPI+1, 鼓励新虫发帖交流！ 2012-03-26 19:55:26
我也遇到过这种情况，的确很难解决，我觉得可以从以下几点尝试：
1.降低温度，最容易想到的方法，文献中有很多都是这么做的，但是有时候效果并不是很明显，最多可降至8℃；
2.分析自己序列的疏水氨基酸含量，并进行信号肽预测，必要时可将信号肽切除，因为一般来说信号肽中疏水氨基酸多，会影响蛋白质可溶；
3.可以做一个OD值的梯度，OD0.4-0.6是分子克隆提供的条件，很多文献也这么做，但是这个条件不适合溶解性低的蛋白，OD1.0时效果一般比较好，你可以试试别的OD值。
4.IPTG的浓度影响不太大，但是我试过将IPTG浓度降低十倍，一点儿也不影响效果，IPTG价格还是比较贵的，能省就省吧。
5.如果上述都不行，就只剩最后一种方法了，换载体，对于研究生来说周期应该也不长，毕竟都做过这个，例如PET-30a之类的。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
3楼2012-03-26 17:43:29
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ningxi123456

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by imyting at 2012-03-26 17:43:29:
我也遇到过这种情况，的确很难解决，我觉得可以从以下几点尝试：
1.降低温度，最容易想到的方法，文献中有很多都是这么做的，但是有时候效果并不是很明显，最多可降至8℃；
2.分析自己序列的疏水氨基酸含量，并 ...

我用过16度诱导14小时，没有诱导出来的呢
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4楼2012-03-26 19:04:15
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