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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 沸水提取植物多糖,分离困难

求助:
采用沸水提取植物根皮,茎皮,叶。提取液茎超滤,去掉了分子量小于5000的分子,然后冷冻干燥后,直接上离子交换树脂,用0-1.5M NaCl梯度洗脱,很难洗下来(目标成分多糖)。请问各位前辈,可能原因及解决方案,非常感谢啊。
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by gujinwang at 2012-03-25 10:56:29:
你可以用醇水提取,可能会引入一些极性小的杂质

我们用沸水提取的目的就是模拟中药煎煮,然后研究其中的多糖。但沸水提取的杂质太多,糖含量只有10%不到。
6楼2012-03-25 16:21:34
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by fjamigo at 2012-03-25 12:15:35:
应该用80度的水提取才可以啊,然后脱蛋白,脱盐,上大孔也可以啊

现在国外老板叫我直接上,效果不好,用脱盐柱洗了之后,上样效果依然不好啊
7楼2012-03-25 16:22:38
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by monkey514 at 2012-03-25 12:34:56:
为什么用树脂分呢?我感觉你的洗脱剂最好是拿Sephadex G系列的凝胶进行分离,你最好先用液相测定一下分子量在选择相应的凝胶型号,我那时候就是这么分离的,效果很好,祝楼主顺利

现在我估计是沸水提取物其他杂质太多,影响分离效果,我们是用的ANX 4 fast flow,阴离子交换树脂。
8楼2012-03-25 16:24:38
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by fjamigo at 2012-03-25 12:16:52:
我们实验室的那位同学是先检测了多糖的含量,用的是苯酚硫酸法,分离用的是凝胶,然后用GPC做的检测

我们测了多糖含量了,大约10%,目前想法是先有离子交换树脂分离后再用凝胶,可现在就是离子交换树脂效果不好,很难分离。
9楼2012-03-25 16:26:08
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by zyxme at 2012-03-27 06:59:11:
手段很多很多,比如你提后用试用不同尝试的醇沉,用不同精度的柱子超滤,或者后期不同温度沉淀都会有不错的效果,,,

嗯,只能试试了。谢谢。
16楼2012-03-28 02:00:18
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

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22楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-10-09 19:58:52
那个 嘿嘿 我问一下 若是做寡糖 是不是也可以先用HPLC测定一下分子量 再用相应的凝胶型号??那用HPLC怎么测分子量啊???我是新手 恳请指教...

我们是直接用凝胶测分子量。
23楼2012-10-10 01:41:59
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