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anjing安静

新虫 (小有名气)

[求助] 大蒜提取液做液相遇到的各种问题

大家好,关于液相我是新手。现在遇到了不少麻烦,大家先看图
图1是标准品图谱
图2是样品图
图3 流动相 梯度流动
从标品图可以看出,我的目标物质是在5.122min处出峰,而样品图中,目标物质应该是5.00min的那个峰,含量很少,基本被杂峰掩盖了,而且分离度也存在一定的问题。前处理条件是大蒜泥在90~100℃条件下水浴2h的提取物。问题就是(1)考虑到杂质峰大,分离度不高,液相前除杂是否能用超滤截留一下,目标物质分子量161.2,除掉大分子?(2)虽然使用的是甲醇和水的梯度流动,但是没有将目标物质与前后的峰分开,是不是可以直接采用定比例流动相?PS:做液相是为检测一下目标物质的含量。麻烦各位有经验的虫子指导,谢谢!
大蒜提取液做液相遇到的各种问题
图1 标准品.png


大蒜提取液做液相遇到的各种问题-1
图2 样品图.png


大蒜提取液做液相遇到的各种问题-2
图3 流动相.png

[ Last edited by anjing安静 on 2013-10-27 at 15:46 ]
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剑客

木虫 (知名作家)

我觉得应该是液相条件没选好,再优化下?
2楼2013-10-27 21:32:48
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happyer520

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
这个出峰时间太快了
可以先试着调一下流动相比例
3楼2013-10-27 23:00:21
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henryyelei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的甲醇都用到3%了,估计调流动相比例是不可能的了,你现在要么就是换色谱柱,如果你现在用的是C18柱的话,建议改用HILIC分离系统的色谱柱试试,如果你觉得换色谱柱太贵,只能把水换成缓冲盐,这个需要和你要分析的目标物的PKa来定,个人倾向于第一种
4楼2013-10-28 08:31:23
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w217666

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从图里分析
你的目标物质是5.00的那个峰,但你的梯度洗脱0-5.5分钟其实是一个等度的过程,甲醇:水=3:97
从分离度来看是没有完全分开的,建议调整0-5.5分钟的梯度过程,按照极性调整比例,可以从50:50开始摸起
5楼2013-10-28 10:11:18
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luke6zhang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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水提物,大量氨基酸,糖或糖苷,或其它极性较大的化合物混在一起,很多都有紫外吸收,你要个100多分子量的东西,真是挺难的,得考虑更好的前处理方法。
如果没有更好的方法,只能像4楼大虾说的换用HILIC试试,或者弄个正相柱试试了。
人生就是苦难重重~
6楼2013-10-28 10:55:25
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

这种东西也敢进液相,色谱柱不想要了?
7楼2013-10-28 12:42:53
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yxx_chris

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一:进样前用超滤处理,应该对液相的结果没有大的改变,一些大分子在液相上本身不出峰。用超滤预处理会对色谱柱的寿命有好处;
第二:我觉得单单这种初提物用液相来定含量是不大现实的,成分本身就太复杂,还需要进一步提纯,再反过来看看该物质的位置,调整液相条件;
第三:从目前的液相条件来看,调流动相的比例应该也不起很大的作用。建议换色谱柱,或是用乙腈做流动相试一试,方法还要开发。
个人意见。
8楼2013-10-28 14:52:29
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