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OAOA_

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】农药 如何添加到固体培养基中?

做农药诱导酵母菌的实验。(原本考虑到农药添加到固体培养基中可能比较麻烦,所以打算液体培养,但考虑到培养后还需要涂到平板看表型,如果平板不含农药的话,不能确定该表型是否是农药依赖的,所以想求教农药添加到固体平板的方法)

现在有如下疑问,
1.因为农药成分复杂,不适宜和培养基其他成分混合一起高温灭菌,可否用抽滤除菌?高温灭菌后的medium冷却到什么程度 再加入农药(除菌后的)合适呢?
2.知道农药有些不易溶于水,可以加DMSO助溶么?这对于固体培养基有影响么?
3.这样配好的medium,怎么检验其质量呢?(从颜色、是否凝固这些方面?)

召唤大牛,求解答求提点~~
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yinyanwell

银虫 (小有名气)

1.我当时是每次做的每次都用完了,没有在冰箱里放置,只要农药不挥发,影响可能就不会很大,你可以是一下
2.农药抑制试验挺好做的,我当时做的时候效果特别明显
4楼2012-03-24 09:18:44
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yinyanwell

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+3, MicEPI+1, 鼓励帮助解答问题! 2012-03-23 18:13:19
OAOA_: 金币+3 2012-03-24 15:06:43
1.可以采用过滤除菌的方法,在培养基冷却到50摄氏度左右(一般凭经验,在培养基快凝固时)加入农药。
2.如果加入了助溶剂,则相应的在对照里加入助溶剂,同时需做不加任何物质的对照组,以期澄清加入助溶剂的影响。
3.其培养基的质量主要看平板中是否有不溶物,农药是否溶解均匀。
4.我做农药抑菌实验时,没加助溶剂。

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2楼2012-03-23 15:16:51
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OAOA_

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yinyanwell at 2012-03-23 15:16:51:
1.可以采用过滤除菌的方法,在培养基冷却到50摄氏度左右(一般凭经验,在培养基快凝固时)加入农药。
2.如果加入了助溶剂,则相应的在对照里加入助溶剂,同时需做不加任何物质的对照组,以期澄清加入助溶剂的影响 ...

非常感谢!以前没做过,担心农药加固体培养基会出问题~呵呵 这样放心多了
还有几个问题求解,
1.含农药的固体培养基能放多久?跟普通板一样不?(因为每次配的某个浓度的培养基能倒好多板,做抑菌肯定用不了那么多,想知道剩余的这些板能不能留到做表型时候用?)
2.你当时做的时候,感觉这种板好做么?实验效果如何呢?
3楼2012-03-23 17:13:23
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OAOA_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yinyanwell at 2012-03-24 09:18:44:
1.我当时是每次做的每次都用完了,没有在冰箱里放置,只要农药不挥发,影响可能就不会很大,你可以是一下
2.农药抑制试验挺好做的,我当时做的时候效果特别明显

OK~~最后还有两个疑问
1.要测MIC时候 怎么设置浓度梯度合适?(看了些文献 想试试0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 2.0 mg/L 可以么?)
2.接触农药时需要专门防护措施不?手套 口罩啥的?谢谢啦
5楼2012-03-24 10:39:33
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