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lwtong8320

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

，帮顶一下！

你的基因组总DNA是用试剂盒提的，还是手提的呀？里面是不是有什么东西在干扰呀，要不用无水乙醇沉淀一下，再试试，要不干脆重新提一次吧！

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努力！努力！再努力！

11楼2012-03-23 19:42:45

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lincy2010

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 分析有理，且证据充分^_^ 2012-03-25 14:26:05

我没切过大基因组，但就我切大质粒（45kb左右）时发现很明显切出来小的片断很暗，不仔细看基本看不出，条带的亮度随片断大小的增大而增大，最小的300bp与最大的27kb的亮度相差相当大（见附图，共6条，右边是marker，最小的marker500bp，仔细看，在模糊的RNA带和500bp marker间还是可以看到最小条带的）。其实也显而易见，切的所有片断摩尔量都一样，自然片断越大越亮。有的时候质粒提的浓度不够，酶切只看到大条带。所以我觉得可能你的有切出片断来，但照你切着基因组的亮度来看，跑胶是看不到的切出的小条带的，我质粒提的都还比你的亮呢，小条带不还少得几乎看不见，你基因组肯定大于45kb吧，那情况就更严重了说不定。
当然，这只是我个人看法。

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12楼2012-03-23 21:27:40

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w26150665w

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11楼: Originally posted by lwtong8320 at 2012-03-23 19:42:45:

呵呵手提

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13楼2012-03-23 22:13:52

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w26150665w

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12楼: Originally posted by lincy2010 at 2012-03-23 21:27:40:
我没切过大基因组，但就我切大质粒（45kb左右）时发现很明显切出来小的片断很暗，不仔细看基本看不出，条带的亮度随片断大小的增大而增大，最小的300bp与最大的27kb的亮度相差相当大（见附图，共6条，右边是marke ...

嗯很大今晚切动了好像是我体系的问题谢谢大伙

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14楼2012-03-23 22:15:23

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w26150665w

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感谢大家的建议和分析，今晚我调整了体系，切切看，明天再做个电泳，希望能和大家继续讨论。不过我真觉得自己手抽的比试剂盒还要纯。

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15楼2012-03-23 22:20:18

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lincy2010

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★
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:26:22

引用回帖:

15楼: Originally posted by w26150665w at 2012-03-23 22:20:18:
感谢大家的建议和分析，今晚我调整了体系，切切看，明天再做个电泳，希望能和大家继续讨论。不过我真觉得自己手抽的比试剂盒还要纯。

手提的确实会比试剂盒提的浓度高很多，我提的高了几十倍

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16楼2012-03-23 22:42:00

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w26150665w

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西瓜: 回帖置顶 2012-03-25 14:26:26

昨天的电泳跑出了类似“拖尾”的条带，是不是说明我切开了啊，各位？

左到右：切前，切3、4h后

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17楼2012-03-24 15:42:01

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lincy2010

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17楼: Originally posted by w26150665w at 2012-03-24 15:42:01:
昨天的电泳跑出了类似“拖尾”的条带，是不是说明我切开了啊，各位？

02/fe/1683197_1332574884_573.jpg
左到右：切前，切3、4h后

不能说明问题吧，我觉得你还是用浓度很高的基因组进行酶切，或者加大酶切体系，然后再醇沉浓缩，再跑胶可能才能跑得出来，因为照你所说有900多酶切位点，那每个片段的质量浓度就很小

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18楼2012-03-25 15:07:33

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w26150665w

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18楼: Originally posted by lincy2010 at 2012-03-25 15:07:33:
不能说明问题吧，我觉得你还是用浓度很高的基因组进行酶切，或者加大酶切体系，然后再醇沉浓缩，再跑胶可能才能跑得出来，因为照你所说有900多酶切位点，那每个片段的质量浓度就很小

哦我也不知道怎么做才好了，一直在酶切从未切分明过。

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19楼2012-03-25 15:13:18

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XOooZzz

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20楼2012-03-26 10:23:44

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