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lwtong8320

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
,帮顶一下!

你的基因组总DNA是用试剂盒提的,还是手提的呀?里面是不是有什么东西在干扰呀,要不用无水乙醇沉淀一下,再试试,要不干脆重新提一次吧!
努力!努力!再努力!
11楼2012-03-23 19:42:45
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lincy2010

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 分析有理,且证据充分^_^ 2012-03-25 14:26:05
我没切过大基因组,但就我切大质粒(45kb左右)时发现很明显切出来小的片断很暗,不仔细看基本看不出,条带的亮度随片断大小的增大而增大,最小的300bp与最大的27kb的亮度相差相当大(见附图,共6条,右边是marker,最小的marker500bp,仔细看,在模糊的RNA带和500bp marker间还是可以看到最小条带的)。其实也显而易见,切的所有片断摩尔量都一样,自然片断越大越亮。有的时候质粒提的浓度不够,酶切只看到大条带。所以我觉得可能你的有切出片断来,但照你切着基因组的亮度来看,跑胶是看不到的切出的小条带的,我质粒提的都还比你的亮呢,小条带不还少得几乎看不见,你基因组肯定大于45kb吧,那情况就更严重了说不定。
当然,这只是我个人看法。


耐得住寂寞,方能遇见繁华
12楼2012-03-23 21:27:40
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lwtong8320 at 2012-03-23 19:42:45:
,帮顶一下!

你的基因组总DNA是用试剂盒提的,还是手提的呀?里面是不是有什么东西在干扰呀,要不用无水乙醇沉淀一下,再试试,要不干脆重新提一次吧!

呵呵 手提
多多交流学习
13楼2012-03-23 22:13:52
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by lincy2010 at 2012-03-23 21:27:40:
我没切过大基因组,但就我切大质粒(45kb左右)时发现很明显切出来小的片断很暗,不仔细看基本看不出,条带的亮度随片断大小的增大而增大,最小的300bp与最大的27kb的亮度相差相当大(见附图,共6条,右边是marke ...

嗯 很大 今晚切动了好像 是我体系的问题 谢谢大伙
多多交流学习
14楼2012-03-23 22:15:23
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

感谢大家的建议和分析,今晚我调整了体系,切切看,明天再做个电泳,希望能和大家继续讨论。不过我真觉得自己手抽的比试剂盒还要纯。
多多交流学习
15楼2012-03-23 22:20:18
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lincy2010

银虫 (小有名气)


西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:26:22
引用回帖:
15楼: Originally posted by w26150665w at 2012-03-23 22:20:18:
感谢大家的建议和分析,今晚我调整了体系,切切看,明天再做个电泳,希望能和大家继续讨论。不过我真觉得自己手抽的比试剂盒还要纯。

手提的确实会比试剂盒提的浓度高很多,我提的高了几十倍
耐得住寂寞,方能遇见繁华
16楼2012-03-23 22:42:00
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

西瓜: 回帖置顶 2012-03-25 14:26:26
昨天的电泳跑出了类似“拖尾”的条带,是不是说明我切开了啊,各位?

左到右:切前,切3、4h后

多多交流学习
17楼2012-03-24 15:42:01
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lincy2010

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by w26150665w at 2012-03-24 15:42:01:
昨天的电泳跑出了类似“拖尾”的条带,是不是说明我切开了啊,各位?
02/fe/1683197_1332574884_573.jpg
左到右:切前,切3、4h后

不能说明问题吧,我觉得你还是用浓度很高的基因组进行酶切,或者加大酶切体系,然后再醇沉浓缩,再跑胶可能才能跑得出来,因为照你所说有900多酶切位点,那每个片段的质量浓度就很小
耐得住寂寞,方能遇见繁华
18楼2012-03-25 15:07:33
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by lincy2010 at 2012-03-25 15:07:33:
不能说明问题吧,我觉得你还是用浓度很高的基因组进行酶切,或者加大酶切体系,然后再醇沉浓缩,再跑胶可能才能跑得出来,因为照你所说有900多酶切位点,那每个片段的质量浓度就很小

哦 我也不知道怎么做才好了,一直在酶切 从未切分明过。
多多交流学习
19楼2012-03-25 15:13:18
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

内容已删除
20楼2012-03-26 10:23:44
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