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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白诱导不能表达!

我构建的pet-28a重组载体,测序后序列正确,但是我叫IPTG诱导12小时。20度后却没有发现目的大小的条带,请问这是什么原因?
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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-03-23 10:15:52:
我取菌液离心,稀释,直接加loading煮沸,上样跑胶,,没有看到目的大小的蛋白。

建议你对菌液进行一下破碎,破碎后的产物上样,看看是否有条带,同时做一下发酵液的空白对照
17楼2012-03-23 12:13:06
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
温度是不是太低?菌长了吗?IPTG浓度多少?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

jiayoubashaonian
2楼2012-03-20 20:22:11
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-03-20 20:22:11:
温度是不是太低?菌长了吗?IPTG浓度多少?

菌体长的还是挺多的,IPTG浓度为1mM。
3楼2012-03-20 20:43:05
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xiangyunch

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是目标基因片段过大,导致表达量改变较小?还有可以设下时间梯度试试
4楼2012-03-21 09:23:43
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