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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白诱导不能表达！
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
可能表达量太低了，可以用对应的抗体做WB检测下。
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11楼2012-03-21 20:39:53
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pplu0329

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌长的多不代表就可以诱导表达，OD值测了没？各种菌的生命力不一样，大部分超过16个小时扩增菌就老了或者已经死亡。
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12楼2012-03-22 17:21:45
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sunwei57

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说一下蛋白的性质,膜蛋白 一般在原核中不能正确表达
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13楼2012-03-22 17:50:55
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导时间好长啊...我做的时候3-4小时就有很多蛋白了，建议你看看是不是蛋白表达都在包涵体中。
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14楼2012-03-23 09:49:55
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-23 09:49:55:
诱导时间好长啊...我做的时候3-4小时就有很多蛋白了，建议你看看是不是蛋白表达都在包涵体中。

我取菌液离心，稀释，直接加loading煮沸，上样跑胶，，没有看到目的大小的蛋白。
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15楼2012-03-23 10:15:52
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by sunwei57 at 2012-03-22 17:50:55:
说一下蛋白的性质,膜蛋白 一般在原核中不能正确表达

不是膜蛋白，是一个植物蛋白，大小为12KD左右。
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16楼2012-03-23 10:16:35
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-03-23 10:15:52:
我取菌液离心，稀释，直接加loading煮沸，上样跑胶，，没有看到目的大小的蛋白。

建议你对菌液进行一下破碎，破碎后的产物上样，看看是否有条带，同时做一下发酵液的空白对照
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17楼2012-03-23 12:13:06
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-23 12:13:06:
建议你对菌液进行一下破碎，破碎后的产物上样，看看是否有条带，同时做一下发酵液的空白对照

超声破碎的的，稀释多少倍呢，会不会浓度太低，不好检测？
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18楼2012-03-23 13:52:46
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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
除了上述版友说到的一些原因（如：摸索下不同温度，诱导剂加入时间的优化等等）， 我建议你可以坐下Western Blot检测一下，用抗His的抗体
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尔非我焉知我悲喜
19楼2012-03-23 15:43:00
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-03-23 13:52:46:
超声破碎的的，稀释多少倍呢，会不会浓度太低，不好检测？

稀释倍数看菌浓，可以做几个梯度的稀释，要是都没有条带的话很可能是载体构建的问题了，PS：最好做一个空载的空白对照
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20楼2012-03-23 15:58:45
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