24小时热门版块排行榜    

查看: 2461  |  回复: 21

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

可能表达量太低了,可以用对应的抗体做WB检测下。
关注我关注的
11楼2012-03-21 20:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pplu0329

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌长的多不代表就可以诱导表达,OD值测了没?各种菌的生命力不一样,大部分超过16个小时扩增菌就老了或者已经死亡。
12楼2012-03-22 17:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说一下蛋白的性质,膜蛋白 一般在原核中不能正确表达
13楼2012-03-22 17:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时间好长啊...我做的时候3-4小时就有很多蛋白了,建议你看看是不是蛋白表达都在包涵体中。
14楼2012-03-23 09:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-23 09:49:55:
诱导时间好长啊...我做的时候3-4小时就有很多蛋白了,建议你看看是不是蛋白表达都在包涵体中。

我取菌液离心,稀释,直接加loading煮沸,上样跑胶,,没有看到目的大小的蛋白。
15楼2012-03-23 10:15:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by sunwei57 at 2012-03-22 17:50:55:
说一下蛋白的性质,膜蛋白 一般在原核中不能正确表达

不是膜蛋白,是一个植物蛋白,大小为12KD左右。
16楼2012-03-23 10:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-03-23 10:15:52:
我取菌液离心,稀释,直接加loading煮沸,上样跑胶,,没有看到目的大小的蛋白。

建议你对菌液进行一下破碎,破碎后的产物上样,看看是否有条带,同时做一下发酵液的空白对照
17楼2012-03-23 12:13:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-23 12:13:06:
建议你对菌液进行一下破碎,破碎后的产物上样,看看是否有条带,同时做一下发酵液的空白对照

超声破碎的的,稀释多少倍呢,会不会浓度太低,不好检测?
18楼2012-03-23 13:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
除了上述版友说到的一些原因(如:摸索下不同温度,诱导剂加入时间的优化等等), 我建议你可以坐下Western Blot检测一下,用抗His的抗体
尔非我焉知我悲喜
19楼2012-03-23 15:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-03-23 13:52:46:
超声破碎的的,稀释多少倍呢,会不会浓度太低,不好检测?

稀释倍数看菌浓,可以做几个梯度的稀释,要是都没有条带的话很可能是载体构建的问题了,PS:最好做一个空载的空白对照
20楼2012-03-23 15:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 viki_MDK 的主题更新
信息提示
请填处理意见