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zhu_linying

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cnb1987 at 2012-03-20 13:15:23:
童鞋，在PCR的时候你一定要下功夫在引物设计上，我刚开始做的时候也是这种情况，以前用别人设计的引物，怎么扩都扩不出来，扩出来也是你这种情况，引物的特异性不好，现在自己做实验了，自己设计引物，连本科生上 ...

咱俩用的引物一样么？我用的是师姐的，是细菌16srDAN通用引物，难道通用引物也可以改么？
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11楼2012-03-20 19:20:50
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倔强的投手

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看着是非特异性扩增，估计是引物的问题
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12楼2012-03-20 19:27:48
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cnb1987

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-21 17:13:30
我们不做细菌的，你这个非特异扩增好明显，Marker跑的比条带好，证明还是产物的问题，你再好好优化一下条件，我没有用过通用引物，你再问问你师姐关于引物的情况！如果长时间还没扩出来，就换引物吧！
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13楼2012-03-21 08:33:19
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阳光灰灰

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-21 17:13:39
既然都做了那么多温度梯度，特异性还是不太好，重新设计引物试试吧，胶的浓度也可以大些，我们有时用3%或4%的
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14楼2012-03-21 09:11:26
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sunwei57

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-21 17:13:55
片断较小,建议用3%的胶,从你的条带亮度显示你可以再增加点模板量或增加循环次数
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15楼2012-03-21 09:11:58
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咖啡加点糖

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你看看大浓度的胶，低电压，长时间跑出来是什么样子，还是不行的话我也觉得应该换引物了！祝顺利
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16楼2012-03-21 09:48:46
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yjb3344

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, Good！ 2012-03-21 17:14:14
琼脂糖这种现象很正常
用聚丙烯酰胺试试
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不论在世界的任何角落·都要感到幸福
17楼2012-03-21 10:47:41
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zcc3255

木虫 (正式写手)

熊猫

【答案】应助回帖

★
zhu_linying: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-22 21:55:16
引用回帖:
7楼: Originally posted by cnb1987 at 2012-03-20 13:15:23:
童鞋，在PCR的时候你一定要下功夫在引物设计上，我刚开始做的时候也是这种情况，以前用别人设计的引物，怎么扩都扩不出来，扩出来也是你这种情况，引物的特异性不好，现在自己做实验了，自己设计引物，连本科生上 ...

好好学习吧，PCR的东西太多了，P出来了怎么都对，P 不好原因太多了，程序设计、引物，体系也是很大的问题，
我们原来一直用上海生工的，实验室的都能P出来，偶就P 不出来，郁闷啊，换了隔壁的TAKARA还不行；怕自己操作问题，让同学帮忙一起P 还不行；后来用了宿舍的一个MIX好了，不过条带浓度很低。还好，我只要P出来割胶回收就好了
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18楼2012-03-21 18:52:19
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real-gold

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
曾经也遇到相同情况，
换酶，改用takara的一款叫什么probest，拼写一定是错了。
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19楼2012-03-22 19:21:45
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zhu_linying

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by real-gold at 2012-03-22 19:21:45:
曾经也遇到相同情况，
换酶，改用takara的一款叫什么probest，拼写一定是错了。

是什么酶啊？能给些具体信息么？是高保真酶么？
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20楼2012-03-22 23:10:51
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