24小时热门版块排行榜    

查看: 3590  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhu_linying

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼,求助ing!

我从土壤中提取总DNA,用细菌通用引物F338-GC/R518,最近pcr出来的结果有两条离的很近的带,目的条带很宽,温度梯度都做了55-66,都是有两条很近的带,求高手相助,万分感谢!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-21 17:13:30
我们不做细菌的,你这个非特异扩增好明显,Marker跑的比条带好,证明还是产物的问题,你再好好优化一下条件,我没有用过通用引物,你再问问你师姐关于引物的情况!如果长时间还没扩出来,就换引物吧!
13楼2012-03-21 08:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助!欢迎常来哈~ 2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度,更换电泳缓冲液,将低电压和电泳时间,调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾,祝好
将相本无种★男儿当自强
2楼2012-03-20 09:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小,提高胶浓度是个好办法! 2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外,
建议:
1、调整拍照的焦点和焦距,以MERKER条带清晰为标准;
2、做胶时充分熔解,并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子;
3、提高胶浓度。

另:楼主的marker可是DL2000?
3楼2012-03-20 09:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助! 2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
4楼2012-03-20 09:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见