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pcr 带好宽啊!苦恼,求助ing!
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zhu_linying
新虫
(初入文坛)
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(幼儿园)
金币: 29.5
帖子: 16
在线: 7.9小时
虫号: 1698733
注册: 2012-03-17
专业: 环境微生物学
[
求助
]
pcr 带好宽啊!苦恼,求助ing!
我从土壤中提取总DNA,用细菌通用引物F338-GC/R518,最近pcr出来的结果有两条离的很近的带,目的条带很宽,温度梯度都做了55-66,都是有两条很近的带,求高手相助,万分感谢!!
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1楼
2012-03-20 00:16:58
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yjb3344
木虫
(正式写手)
应助: 11
(小学生)
金币: 160.7
散金: 1480
帖子: 462
在线: 115.4小时
虫号: 886880
注册: 2009-10-28
专业: 发育生物学
【答案】应助回帖
★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, Good!
2012-03-21 17:14:14
琼脂糖这种现象很正常
用聚丙烯酰胺试试
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高级回复
不论在世界的任何角落·都要感到幸福
17楼
2012-03-21 10:47:41
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rommel1941
铁杆木虫
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情定山河
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(初中生)
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散金: 269
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帖子: 694
在线: 110.8小时
虫号: 67197
注册: 2005-05-05
性别: GG
专业: 分子与进化生态学
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助!欢迎常来哈~
2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度,更换电泳缓冲液,将低电压和电泳时间,调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾,祝好
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将相本无种★男儿当自强
2楼
2012-03-20 09:03:00
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gaoxiang6521
铁杆木虫
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应助: 1
(幼儿园)
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散金: 20
帖子: 2328
在线: 31.1小时
虫号: 598270
注册: 2008-09-10
性别:
MM
专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小,提高胶浓度是个好办法!
2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外,
建议:
1、调整拍照的焦点和焦距,以MERKER条带清晰为标准;
2、做胶时充分熔解,并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子;
3、提高胶浓度。
另:楼主的marker可是DL2000?
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3楼
2012-03-20 09:30:09
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whb21
木虫
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红花: 7
帖子: 2994
在线: 172.4小时
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注册: 2009-12-15
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助!
2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
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4楼
2012-03-20 09:40:53
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售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
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XQNyDCa1Tk5n
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考博
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售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
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考博
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售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
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售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
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教师之家
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售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
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售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
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