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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!

我从土壤中提取总DNA，用细菌通用引物F338-GC/R518，最近pcr出来的结果有两条离的很近的带，目的条带很宽，温度梯度都做了55-66，都是有两条很近的带，求高手相助，万分感谢！！
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1楼 2012-03-20 00:16:58
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zcc3255

木虫 (正式写手)

熊猫

【答案】应助回帖

★
zhu_linying: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-22 21:55:16
引用回帖:
7楼: Originally posted by cnb1987 at 2012-03-20 13:15:23:
童鞋，在PCR的时候你一定要下功夫在引物设计上，我刚开始做的时候也是这种情况，以前用别人设计的引物，怎么扩都扩不出来，扩出来也是你这种情况，引物的特异性不好，现在自己做实验了，自己设计引物，连本科生上 ...

好好学习吧，PCR的东西太多了，P出来了怎么都对，P 不好原因太多了，程序设计、引物，体系也是很大的问题，
我们原来一直用上海生工的，实验室的都能P出来，偶就P 不出来，郁闷啊，换了隔壁的TAKARA还不行；怕自己操作问题，让同学帮忙一起P 还不行；后来用了宿舍的一个MIX好了，不过条带浓度很低。还好，我只要P出来割胶回收就好了
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18楼2012-03-21 18:52:19
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！欢迎常来哈~ 2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度，更换电泳缓冲液，将低电压和电泳时间，调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾，祝好
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将相本无种★男儿当自强
2楼2012-03-20 09:03:00
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gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小，提高胶浓度是个好办法！ 2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外，
建议：
1、调整拍照的焦点和焦距，以MERKER条带清晰为标准；
2、做胶时充分熔解，并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子；
3、提高胶浓度。

另：楼主的marker可是DL2000?
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3楼2012-03-20 09:30:09
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
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4楼2012-03-20 09:40:53
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