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若然飞翔

新虫 (初入文坛)

[求助] 利用CHO进行分泌表达

Sample Text    我想利用CHO细胞分泌表达一个膜蛋白,从上游构建开始,我该如何选择可以在CHO中进行高效表达的载体?如果使用pCDNA3.1,启动子,增强子我该如何处理?如何选择信号肽啊?刚开始接触,有太多不明白的地方了,请大家帮帮忙
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十口心思

木虫 (小有名气)

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若然飞翔: 金币+5, 有帮助 2012-03-22 21:26:52
分泌信号肽可以用优化的IL-2序列。可以参照一些商业化的质粒。真核分泌需要优化很多条件,顺转CHO没293高,可以达到每升几百毫克,但很麻烦。你没有经验,一般你最多只能做到ug/L的样子,可能搞了几升,最后拿到纯蛋白也就几微克。最后要做晶体? 那~
9楼2012-03-22 00:18:35
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十口心思

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
若然飞翔: 金币+2, 有帮助 2012-03-24 14:25:50
西瓜: 金币+3, Good! 2012-03-25 14:15:27
不必纠结于信号肽,用常用穿膜的,文献里常用的就行。 这不是决定表达量的关键因素,是优化因素。要制备抗体,估计你老板是要做全人抗体。要是做小鼠的,做肽段就行,更不用纯化了。但现在也有不用纯化就可以制备抗体的办法。R&D的蛋白挺全的,你直接买吧。
12楼2012-03-23 22:56:19
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