24小时热门版块排行榜    

查看: 1128  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 关于RNAi实验 已有5人参与

本人即将开始做RNAi实验,对整个实验流程有所了解,但有些细节希望过来人指点一二,小女子在此先谢过了。
1、根据目的基因的ORF序列设计了引物,用来扩增序列中富含siRNA位点的区域。
  阴性对照基因选择了GFRP。此处我选择了ORF序列,是否有必要?还是用全长直接来设计就行?因为看到过介绍,说是不要用3‘和5’上游的调控区来设计。
2、扩增片段用于体外反转录。此处有一问题,扩增后的片段是否需要连接转化测序,以确定就是目的序列?
3、还有RNAi引物的3‘端悬挂核酸,AA或UU,究竟是什么意思?
再次感谢。
回复此楼
Things change, people grow.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-03-16 18:16:36:
我们是在ORF中选几百bp的片段连到L4440然后转HT115进行干扰的进行干扰的。有的ORF短的就直接用ORF。效果还不错,对照直接用的L4440的空载进行的干扰。不知楼主干扰的什么物种。

谢谢指教哈。我们是做海洋生物的,这方面做的似乎不多
Things change, people grow.
6楼2012-03-17 10:10:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

展望明天

银虫 (小有名气)

加油。。本科生飘过
standuporgohome,it'syourfuckingchoice,doyoustillrememberthereasonwhyyouarehere?
2楼2012-03-16 11:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andyzhengwp

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
扩增后的片段要需要连接转化,但不需要测序啊,直接做一个没切验证,跑胶看看有没有就可以了...引物两端加碱基是为了保护引物的
每天坚持一点点,终会成功!相信自己
3楼2012-03-16 12:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holygoof

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Privatversicherte machen keine Angaben zur Krankenversicherung
4楼2012-03-16 17:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +9 Tide man 2026-08-11 9/450 2026-08-12 20:30 by 微不足道士
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见