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胡乱走走2011银虫 (著名写手)
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[交流]
关于RNAi实验 已有5人参与
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本人即将开始做RNAi实验，对整个实验流程有所了解，但有些细节希望过来人指点一二，小女子在此先谢过了。 1、根据目的基因的ORF序列设计了引物，用来扩增序列中富含siRNA位点的区域。 阴性对照基因选择了GFRP。此处我选择了ORF序列，是否有必要？还是用全长直接来设计就行？因为看到过介绍，说是不要用3‘和5’上游的调控区来设计。 2、扩增片段用于体外反转录。此处有一问题，扩增后的片段是否需要连接转化测序，以确定就是目的序列？ 3、还有RNAi引物的3‘端悬挂核酸，AA或UU，究竟是什么意思？ 再次感谢。 |
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