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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 关于RNAi实验 已有5人参与

本人即将开始做RNAi实验,对整个实验流程有所了解,但有些细节希望过来人指点一二,小女子在此先谢过了。
1、根据目的基因的ORF序列设计了引物,用来扩增序列中富含siRNA位点的区域。
  阴性对照基因选择了GFRP。此处我选择了ORF序列,是否有必要?还是用全长直接来设计就行?因为看到过介绍,说是不要用3‘和5’上游的调控区来设计。
2、扩增片段用于体外反转录。此处有一问题,扩增后的片段是否需要连接转化测序,以确定就是目的序列?
3、还有RNAi引物的3‘端悬挂核酸,AA或UU,究竟是什么意思?
再次感谢。
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Things change, people grow.
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展望明天

银虫 (小有名气)

加油。。本科生飘过
standuporgohome,it'syourfuckingchoice,doyoustillrememberthereasonwhyyouarehere?
2楼2012-03-16 11:53:23
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
扩增后的片段要需要连接转化,但不需要测序啊,直接做一个没切验证,跑胶看看有没有就可以了...引物两端加碱基是为了保护引物的
每天坚持一点点,终会成功!相信自己
3楼2012-03-16 12:49:20
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holygoof

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Privatversicherte machen keine Angaben zur Krankenversicherung
4楼2012-03-16 17:30:42
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流哈 2012-03-17 09:23:47
我们是在ORF中选几百bp的片段连到L4440然后转HT115进行干扰的进行干扰的。有的ORF短的就直接用ORF。效果还不错,对照直接用的L4440的空载进行的干扰。不知楼主干扰的什么物种。
5楼2012-03-16 18:16:36
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-03-16 18:16:36:
我们是在ORF中选几百bp的片段连到L4440然后转HT115进行干扰的进行干扰的。有的ORF短的就直接用ORF。效果还不错,对照直接用的L4440的空载进行的干扰。不知楼主干扰的什么物种。

谢谢指教哈。我们是做海洋生物的,这方面做的似乎不多
Things change, people grow.
6楼2012-03-17 10:10:11
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by andyzhengwp at 2012-03-16 12:49:20:
扩增后的片段要需要连接转化,但不需要测序啊,直接做一个没切验证,跑胶看看有没有就可以了...引物两端加碱基是为了保护引物的

ok,晓得了,谢谢指教哈。
Things change, people grow.
7楼2012-03-17 10:10:33
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡乱走走2011 at 2012-03-17 10:10:11:
谢谢指教哈。我们是做海洋生物的,这方面做的似乎不多

我们干扰的是昆虫,这种方法是比较廉价且有效的。最近打算把细菌里边表达出的dsRNA提出来在进行干扰。过一阵可能也要做贝类方面的干扰,多交流哈。
8楼2012-04-29 16:40:32
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sdwdty

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
新手飘过,近期也要开展RNAi的工作了~~
9楼2012-05-14 16:55:14
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