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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNAi实验
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 关于RNAi实验 已有5人参与

本人即将开始做RNAi实验，对整个实验流程有所了解，但有些细节希望过来人指点一二，小女子在此先谢过了。
1、根据目的基因的ORF序列设计了引物，用来扩增序列中富含siRNA位点的区域。
  阴性对照基因选择了GFRP。此处我选择了ORF序列，是否有必要？还是用全长直接来设计就行？因为看到过介绍，说是不要用3‘和5’上游的调控区来设计。
2、扩增片段用于体外反转录。此处有一问题，扩增后的片段是否需要连接转化测序，以确定就是目的序列？
3、还有RNAi引物的3‘端悬挂核酸，AA或UU，究竟是什么意思？
再次感谢。
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Things change, people grow.
1楼 2012-03-16 11:12:15
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展望明天

银虫 (小有名气)
加油。。本科生飘过
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standuporgohome,it'syourfuckingchoice,doyoustillrememberthereasonwhyyouarehere?
2楼2012-03-16 11:53:23
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
★
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扩增后的片段要需要连接转化，但不需要测序啊，直接做一个没切验证，跑胶看看有没有就可以了...引物两端加碱基是为了保护引物的
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
3楼2012-03-16 12:49:20
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holygoof

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Privatversicherte machen keine Angaben zur Krankenversicherung
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4楼2012-03-16 17:30:42
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流哈 2012-03-17 09:23:47
我们是在ORF中选几百bp的片段连到L4440然后转HT115进行干扰的进行干扰的。有的ORF短的就直接用ORF。效果还不错，对照直接用的L4440的空载进行的干扰。不知楼主干扰的什么物种。
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5楼2012-03-16 18:16:36
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-03-16 18:16:36:
我们是在ORF中选几百bp的片段连到L4440然后转HT115进行干扰的进行干扰的。有的ORF短的就直接用ORF。效果还不错，对照直接用的L4440的空载进行的干扰。不知楼主干扰的什么物种。

谢谢指教哈。我们是做海洋生物的，这方面做的似乎不多
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Things change, people grow.
6楼2012-03-17 10:10:11
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by andyzhengwp at 2012-03-16 12:49:20:
扩增后的片段要需要连接转化，但不需要测序啊，直接做一个没切验证，跑胶看看有没有就可以了...引物两端加碱基是为了保护引物的

ok，晓得了，谢谢指教哈。
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7楼2012-03-17 10:10:33
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡乱走走2011 at 2012-03-17 10:10:11:
谢谢指教哈。我们是做海洋生物的，这方面做的似乎不多

我们干扰的是昆虫，这种方法是比较廉价且有效的。最近打算把细菌里边表达出的dsRNA提出来在进行干扰。过一阵可能也要做贝类方面的干扰，多交流哈。
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8楼2012-04-29 16:40:32
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sdwdty

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
新手飘过，近期也要开展RNAi的工作了~~
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9楼2012-05-14 16:55:14
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