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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » 激光共聚焦显微镜对载体表面荧光标记蛋白质能定量吗？
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迷雾森林0903

金虫 (正式写手)

[求助] 激光共聚焦显微镜对载体表面荧光标记蛋白质能定量吗？

请求帮忙，激光共聚焦显微镜能对蛋白质定量吗？我主要想看载体表面荧光标记蛋白质有没有上去，以及上去的量。我看到文献一般都给出荧光图像，对于荧光强度是多少能测吗？有些给出相对荧光强度是什么意思？
谢谢各位大侠！
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激光共聚焦显微镜 碳纳米管

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迷雾森林
1楼 2012-03-15 12:19:50
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迷雾森林0903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kadila at 2012-03-15 17:44:37:
一楼说的很对，共聚焦只能半定量或定性，如果准确的统计学上的定量可以采用流式细胞仪，但流式细胞对你的颗粒大小有要求，不能太小，如果很小的话建议用酶标仪测量荧光强度，再设置一组已知浓度组做标准样品。

请问酶标仪怎么测荧光强度？一般酶标不是需要抗体蛋白进行标记，我要测的蛋白（假如BSA）采用一般荧光标记（如FITC）后，这样的标记蛋白吸附于载体，能用酶标仪定量吗
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迷雾森林
4楼2012-03-16 19:07:56
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer: 金币+2, 专家考核, 感谢回帖交流 2012-03-15 18:09:41
迷雾森林0903: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢 2012-03-16 18:41:16
坦白的讲，以我对共聚焦荧光显微镜的了解，只能对荧光强度定性，不能定量。因为调焦是人为控制的，手动调焦需要人的眼睛来判断焦距是否调的很好，而这是不可能实现在相同条件下的荧光记录和分析的，焦距的微小改变能够很大程度上影响荧光强度的变化。所以，这并非造假，而是实验设计本身的特点所决定的。文献中的定量分析，个人认为需要有折扣的相信。
     另外，荧光定量分析最准确的方法是流式细胞仪分析。
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2楼2012-03-15 13:00:33
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kadila

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-15 18:09:50
一楼说的很对，共聚焦只能半定量或定性，如果准确的统计学上的定量可以采用流式细胞仪，但流式细胞对你的颗粒大小有要求，不能太小，如果很小的话建议用酶标仪测量荧光强度，再设置一组已知浓度组做标准样品。
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To be best of myself
3楼2012-03-15 17:44:37
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kadila

铁虫 (小有名气)
★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-19 09:29:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-16 19:07:56:
请问酶标仪怎么测荧光强度？一般酶标不是需要抗体蛋白进行标记，我要测的蛋白（假如BSA）采用一般荧光标记（如FITC）后，这样的标记蛋白吸附于载体，能用酶标仪定量吗

如果定蛋白的量，用BCA法测蛋白浓度是最准确的，如果非用荧光法需要用带有荧光检测功能的酶标仪，检测特定浓度的载体中FITC的荧光强度，再用标记有FITC的蛋白（这个的浓度需要提前知道）做个标准曲线，即可算出载体中蛋白-FITC的浓度
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To be best of myself
5楼2012-03-19 08:49:05
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