[交流] 做过基因枪的请来交流下！

6楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-16 17:37:33:
质粒浓度很关键！至少0.5ug/ul以上，最好是1，每片洋葱最多轰3枪。祝好运！

3楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-03-14 20:33:11:
如果克隆做的没有问题的话，可能多做几次就会出来的。毕竟刚开始做的时候，各种细节和操作把握的不好，另外这种瞬时表达不可靠。

6楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-16 17:37:33:
质粒浓度很关键！至少0.5ug/ul以上，最好是1，每片洋葱最多轰3枪。祝好运！

8楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-17 00:24:41:
记住用confocus来看

6楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-16 17:37:33:
质粒浓度很关键！至少0.5ug/ul以上，最好是1，每片洋葱最多轰3枪。祝好运！

12楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-17 22:54:27:
你好，请问放在同一平板上的洋葱表皮还能轰两枪啊？我上次的只轰了一枪，效率不高，正愁呢！要是一个表皮能连续轰两枪并提高效率就好了啊！

7楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-16 21:53:43:
质粒浓度不管，只要总量保持1ug不可以吗？因为不管浓度多少，最后不都是洗脱的时候去掉水了吗？最终不都是溶于酒精吗？而且轰击时，酒精都挥发掉了啊？？？不懂，求解！谢谢！

8楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-17 00:24:41:
记住用confocus来看

10楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-17 17:34:30:
就是贴在一个板上的洋葱表皮可以连续轰几枪吗？我还不知道这个呢，谢谢了！

13楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-20 16:16:43:
轰两枪是肯定没问题的！如果效率不高，还是要多注意一下调整轰击距离，未开封的无水乙醇，防止子弹结块，以及高的质粒浓度。这个实验很容易的，我的BIFC有的都可以看到成片发光的细胞！

16楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-20 16:30:15:
切块4*4cm大小，轰击的时候不要撕下洋葱表皮，因为后面还要培养，观察的时候根据轰击的范围再撕下表皮观察！

17楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-20 23:55:59:
你好，非常感谢你的热心帮助，请问为什么要用未开封的无水乙醇啊？谢谢解答！

18楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-20 23:57:58:
？？？？我是先撕下表皮贴在MS+山梨醇培养基上后轰击的，可以吗？谢谢你了！

20楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-21 03:45:00:
这是谁出的馊主意啊，用高渗培养基还把表皮撕下来之后才轰击。高渗培养基目的就是培养后方便撕表皮。你这种我没试过，但是我敢肯定把表皮细胞撕下来培养肯定没有整个组织培养活性高。另外如果有尖头镊子，也就是 ...

21楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-21 20:18:37:
你好，不好意思，又要打扰你了，我还有问题请教你！就是质粒浓度是1ug/uL的话，你一般一个子弹用几个ug？还有你说的洋葱表皮不要撕下来，是不是把整片4*4的洋葱（就是鳞茎片，含洋葱肉和内表皮的鳞茎片）放在什么 ...

23楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-23 09:22:28:
对，就用你说的那个鳞茎片，内表皮朝上（也就是基因枪轰过的地方），直接放在MS培养基上就可以了，普通的MS培养基就可以。50ul（3mg）钨粉加入5-10ul质粒，打六枪！平均一个子弹1ug

24楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-03-23 11:35:18:
你好，还得麻烦你，请教你问题啊，就是酒精用国产的的未开封的可以吗？一块鳞茎只轰击一枪可以吗？必须多轰几枪吗？谢谢，不胜感激！

20楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-21 03:45:00
这是谁出的馊主意啊，用高渗培养基还把表皮撕下来之后才轰击。高渗培养基目的就是培养后方便撕表皮。你这种我没试过，但是我敢肯定把表皮细胞撕下来培养肯定没有整个组织培养活性高。另外如果有尖头镊子，也就是那 ...

26楼: Originally posted by 沙漠落日 at 2014-07-14 09:20:51
打扰依稀啊，如果用农杆菌侵染做瞬时表达，表皮是撕下来放MS培养还是整各组织放到高渗培养基上好？...

23楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-23 09:22:28
对，就用你说的那个鳞茎片，内表皮朝上（也就是基因枪轰过的地方），直接放在MS培养基上就可以了，普通的MS培养基就可以。50ul（3mg）钨粉加入5-10ul质粒，打六枪！平均一个子弹1ug...

13楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-20 16:16:43
轰两枪是肯定没问题的！如果效率不高，还是要多注意一下调整轰击距离，未开封的无水乙醇，防止子弹结块，以及高的质粒浓度。这个实验很容易的，我的BIFC有的都可以看到成片发光的细胞！...

19楼: Originally posted by gaolef4s at 2012-03-21 03:34:06
防止子弹结块，如果结块，基本就没有用了！...

31楼: Originally posted by lilylanmei at 2017-01-20 10:45:12
请问如何才能够不结块呢？我新开始做基因枪，我DNA包埋的体系是DNA2ug/ul加5ul，金颗粒30mg/ml加100ul，0.88M亚精胺加5ul，2.5MCaCl2加100ul，打6枪，总是结块，请问如何改善才能不结块呢？
使用不使用新开封的无 ...