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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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30楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-15 21:09:33:
图不用说，很帅，最下面颜色暗暗的，能否解释一下什么情况么

是上样缓冲液的染料，如溴酚蓝一类的东东。
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31楼2012-03-15 21:58:08
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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30楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-15 21:09:33:
图不用说，很帅，最下面颜色暗暗的，能否解释一下什么情况么

我提得是原核细菌的total RNA，用来进行RNA-seq，对RNA的质量要求较高，RIN值要求比较严格。如果是普通的反转录调取基因，只要能扩增出来即可（但一定要注意消化DNA）。

我用的是普通跑DNA电泳的设备，500伏跑了不到10分钟。前面较暗的条带是loading buffer中的溴酚蓝。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
32楼2012-03-16 08:32:14
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-12 15:00:57:
我提取用的枪头是买的一次性的，实验台和移液枪都喷了酒精了，实验过程中都带着口罩和干净手套，求教还有哪里可能没注意到啊？急！急！急！

主要问题还是操作步骤里，我曾经也是非常严格的要求材料，环境，，，但是现在熟悉咯，对材料要求很低，步骤需要改进一下哦，尤其是吕芳那一步，很重要的，
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
33楼2012-03-16 12:55:51
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
33楼: Originally posted by andyzhengwp at 2012-03-16 12:55:51:
主要问题还是操作步骤里，我曾经也是非常严格的要求材料，环境，，，但是现在熟悉咯，对材料要求很低，步骤需要改进一下哦，尤其是吕芳那一步，很重要的，

请问怎么个改进法？我之前是将氯仿那步重复一次，后来老师认为不用重复
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34楼2012-03-16 17:18:52
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 紫菱Kitty at 2012-03-14 19:59:12:
我记得有什么试剂是需要按一定比例混合的，我说的是那个。放久了就失效了。

除了Trizol，还需要氯仿、异丙醇和75%乙醇，75%的乙醇我都是现配现用的啊。
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35楼2012-03-16 17:20:37
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紫菱Kitty

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
35楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-16 17:20:37:
除了Trizol，还需要氯仿、异丙醇和75%乙醇，75%的乙醇我都是现配现用的啊。

速度快点就好了，RNA随时都会被降解。
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梦随风万里，几度洪辰来去。人面桃花长相忆。又是一年春华成秋碧，莫叹明月笑多情。
36楼2012-03-16 20:14:29
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-16 17:18:52:
请问怎么个改进法？我之前是将氯仿那步重复一次，后来老师认为不用重复

摇晃半分钟，静置十分钟，，，，哦哦，问一下你提的是什么的rna啊？
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
37楼2012-03-16 21:44:34
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
主要问题还是操作步骤里，我曾经也是非常严格的要求材料，环境，，，但是现在熟悉咯，对材料要求很低，步骤需要改进一下哦，尤其是吕芳那一步，很重要的
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
38楼2012-03-16 21:45:09
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by andyzhengwp at 2012-03-16 21:44:34:
摇晃半分钟，静置十分钟，，，，哦哦，问一下你提的是什么的rna啊？

反应器里富集的污泥
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39楼2012-03-19 09:34:01
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hardmoon

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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mahoumeimei: 金币+2 2012-03-27 11:26:20
首先墙头EP管之类的要经过DEPC水处理，其次跑电泳用的电泳槽，loading，buffer最好都是新的，未开封的或者是经过清洗处理的，还有就是操作的时候要迅速，要勤换手套。你的RNA来源是什么，是组织、血液还是什么？如果来源没有保存好，操作再好自然也没有。
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40楼2012-03-19 15:15:29
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