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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
根据我实验的经验,已经放弃RNA电泳了,每次都要换新的电泳液,清洗电泳槽,还得高电压。直接逆转录,P个内参跑电泳,直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好,只是电泳过程降解了呢。
也许似乎大概是,然而未必不见得。
11楼2012-03-13 12:14:33
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lilyjimei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahoumeimei(金币+2): 2012-03-14 17:10:19
我之前大量提RNA,最重要的就是要避免RNA降解!你的条带很不清晰而且未分条带,可能原因:1.取的组织少或水溶解过多,导致RNA量太少;2.理论上可以不用跑Marker滴,但从你的Marker看也不太清晰而各条带未分开,可能是胶问题、跑胶时间也短了些;3.从源头上分析,可能样品也已经有些降解!改善实验条件多做几次,熟悉过程,自然速度就快了!~~加油~
12楼2012-03-13 20:02:08
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chenhuize

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.排除实验中可能造成的污染,特别是电泳槽一定要用DEPC处理。
2.电泳之前测一下OD230OD260
3.电压调大,180V   10min就号
13楼2012-03-14 00:12:37
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
预处理很重要,操作过程尽量快,其他的楼上均有说明,其实RNA降解的不是那么快,但是你的提取材料的确不是太好提的,你可以多做,大量做
关关雎鸠,在河之洲
14楼2012-03-14 09:03:34
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑电泳的槽子什么的完全不用处理!
跑不出来不能怪槽子。
我跑RNA从来不处理槽子的,最多换换新的缓冲液,有时缓冲液也不换,该跑好的时候还是好的
15楼2012-03-14 09:16:38
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-13 12:14:33:
根据我实验的经验,已经放弃RNA电泳了,每次都要换新的电泳液,清洗电泳槽,还得高电压。直接逆转录,P个内参跑电泳,直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好,只是电泳过程降解了呢。

跑电泳的槽子什么的完全不用处理!
跑不出来不能怪槽子。
我跑RNA从来不处理槽子的,最多换换新的缓冲液,有时缓冲液也不换,该跑好的时候还是好的
16楼2012-03-14 09:17:15
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 紫菱Kitty at 2012-03-12 23:42:14:
降解得相当严重啊。操作要迅速。还有,可能是你用的试剂太久了需要重新配。我以前碰到过这种情况,换了新的试剂就没事了。

我用的是TAKARA的Trizol试剂
17楼2012-03-14 17:06:05
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by lilyjimei at 2012-03-13 20:02:08:
我之前大量提RNA,最重要的就是要避免RNA降解!你的条带很不清晰而且未分条带,可能原因:1.取的组织少或水溶解过多,导致RNA量太少;2.理论上可以不用跑Marker滴,但从你的Marker看也不太清晰而各条带未分开,可 ...

是的,因为是厌氧菌,长的特别慢,所以biomass很少,又不能取太多样,怕影响反应器运行。你说marker不清晰条带未分开可能是胶的问题,是说我的胶浓度不合适还是其它什么原因?
18楼2012-03-14 17:08:55
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 苏拉的世界 at 2012-03-14 09:03:34:
预处理很重要,操作过程尽量快,其他的楼上均有说明,其实RNA降解的不是那么快,但是你的提取材料的确不是太好提的,你可以多做,大量做

没有办法大量做,样品就那么一点,很宝贵的。
19楼2012-03-14 17:09:53
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-13 12:14:33:
根据我实验的经验,已经放弃RNA电泳了,每次都要换新的电泳液,清洗电泳槽,还得高电压。直接逆转录,P个内参跑电泳,直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好,只是电泳过程降解了呢。

我之前也是嫌处理槽子麻烦,所以就直接逆转录,再对cDNA进行PCR检测。但后来我们老师说好的RNA质量是做逆转录及后面一系列实验的必需条件,而且如果只是简单的看一下RNA质量不需要那么麻烦的处理电泳槽。
20楼2012-03-14 17:14:14
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