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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据我实验的经验，已经放弃RNA电泳了，每次都要换新的电泳液，清洗电泳槽，还得高电压。直接逆转录，P个内参跑电泳，直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好，只是电泳过程降解了呢。
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
11楼2012-03-13 12:14:33
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lilyjimei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei(金币+2): 2012-03-14 17:10:19
我之前大量提RNA，最重要的就是要避免RNA降解！你的条带很不清晰而且未分条带，可能原因：1.取的组织少或水溶解过多，导致RNA量太少；2.理论上可以不用跑Marker滴，但从你的Marker看也不太清晰而各条带未分开，可能是胶问题、跑胶时间也短了些；3.从源头上分析，可能样品也已经有些降解！改善实验条件多做几次，熟悉过程，自然速度就快了！~~加油~
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12楼2012-03-13 20:02:08
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chenhuize

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.排除实验中可能造成的污染，特别是电泳槽一定要用DEPC处理。
2.电泳之前测一下OD230OD260
3.电压调大，180V   10min就号
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13楼2012-03-14 00:12:37
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
预处理很重要，操作过程尽量快，其他的楼上均有说明，其实RNA降解的不是那么快，但是你的提取材料的确不是太好提的，你可以多做，大量做
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关关雎鸠，在河之洲
14楼2012-03-14 09:03:34
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑电泳的槽子什么的完全不用处理！
跑不出来不能怪槽子。
我跑RNA从来不处理槽子的，最多换换新的缓冲液，有时缓冲液也不换，该跑好的时候还是好的
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15楼2012-03-14 09:16:38
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-13 12:14:33:
根据我实验的经验，已经放弃RNA电泳了，每次都要换新的电泳液，清洗电泳槽，还得高电压。直接逆转录，P个内参跑电泳，直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好，只是电泳过程降解了呢。

跑电泳的槽子什么的完全不用处理！
跑不出来不能怪槽子。
我跑RNA从来不处理槽子的，最多换换新的缓冲液，有时缓冲液也不换，该跑好的时候还是好的
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16楼2012-03-14 09:17:15
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 紫菱Kitty at 2012-03-12 23:42:14:
降解得相当严重啊。操作要迅速。还有，可能是你用的试剂太久了需要重新配。我以前碰到过这种情况，换了新的试剂就没事了。

我用的是TAKARA的Trizol试剂
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17楼2012-03-14 17:06:05
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by lilyjimei at 2012-03-13 20:02:08:
我之前大量提RNA，最重要的就是要避免RNA降解！你的条带很不清晰而且未分条带，可能原因：1.取的组织少或水溶解过多，导致RNA量太少；2.理论上可以不用跑Marker滴，但从你的Marker看也不太清晰而各条带未分开，可 ...

是的，因为是厌氧菌，长的特别慢，所以biomass很少，又不能取太多样，怕影响反应器运行。你说marker不清晰条带未分开可能是胶的问题，是说我的胶浓度不合适还是其它什么原因？
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18楼2012-03-14 17:08:55
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 苏拉的世界 at 2012-03-14 09:03:34:
预处理很重要，操作过程尽量快，其他的楼上均有说明，其实RNA降解的不是那么快，但是你的提取材料的确不是太好提的，你可以多做，大量做

没有办法大量做，样品就那么一点，很宝贵的。
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19楼2012-03-14 17:09:53
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-13 12:14:33:
根据我实验的经验，已经放弃RNA电泳了，每次都要换新的电泳液，清洗电泳槽，还得高电压。直接逆转录，P个内参跑电泳，直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好，只是电泳过程降解了呢。

我之前也是嫌处理槽子麻烦，所以就直接逆转录，再对cDNA进行PCR检测。但后来我们老师说好的RNA质量是做逆转录及后面一系列实验的必需条件，而且如果只是简单的看一下RNA质量不需要那么麻烦的处理电泳槽。
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20楼2012-03-14 17:14:14
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