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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳

各位，我的RNA电泳结果很差，是降解了吗？（最左边是生工的100bp DNA ladder）我是刚提完就跑的电泳，是提取过程中操作不当吗？

RNA电泳
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1楼 2012-03-12 10:20:29
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-03-13 12:14:33:
根据我实验的经验，已经放弃RNA电泳了，每次都要换新的电泳液，清洗电泳槽，还得高电压。直接逆转录，P个内参跑电泳，直接检测cDNA质量。或许提取的RNA质量很好，只是电泳过程降解了呢。

我之前也是嫌处理槽子麻烦，所以就直接逆转录，再对cDNA进行PCR检测。但后来我们老师说好的RNA质量是做逆转录及后面一系列实验的必需条件，而且如果只是简单的看一下RNA质量不需要那么麻烦的处理电泳槽。
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20楼2012-03-14 17:14:14
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei(金币+2): 2012-03-12 20:05:20
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带，28s的带的亮度约是18s带的两倍，最低也得等同，一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了，建议认真彻底处理提取用具及环境！
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坚持就是胜利
2楼2012-03-12 12:29:14
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-03-12 12:29:14:
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带，28s的带的亮度约是18s带的两倍，最低也得等同，一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了，建议认真彻底处理提取用具及环境！

我提取用的枪头是买的一次性的，实验台和移液枪都喷了酒精了，实验过程中都带着口罩和干净手套，求教还有哪里可能没注意到啊？急！急！急！
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3楼2012-03-12 15:00:57
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-03-13 10:30:25
mahoumeimei: 金币+1 2012-03-27 11:28:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-12 15:00:57:
我提取用的枪头是买的一次性的，实验台和移液枪都喷了酒精了，实验过程中都带着口罩和干净手套，求教还有哪里可能没注意到啊？急！急！急！

跑电泳的东西也是要处理的。我以前是用试剂盒提取的，所用的管子和枪头也都是买的去RNase的，把制胶的模具和电泳槽用DEPC处理，提取过程尽量迅速，效果还是不错的。你是提取的甚么的RNA呢？
    祝实验成功！
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坚持就是胜利
4楼2012-03-12 17:08:26
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