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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA电泳
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-14 17:09:53:
没有办法大量做，样品就那么一点，很宝贵的。

你是用什么方法提的RNA?
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关关雎鸠，在河之洲
21楼2012-03-14 17:32:24
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紫菱Kitty

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-14 17:06:05:
我用的是TAKARA的Trizol试剂

我记得有什么试剂是需要按一定比例混合的，我说的是那个。放久了就失效了。
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梦随风万里，几度洪辰来去。人面桃花长相忆。又是一年春华成秋碧，莫叹明月笑多情。
22楼2012-03-14 19:59:12
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忆-雪

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-15 13:33:04
1：你可以买RNase-free的枪头，EP管，或者自己用0.1%DEPC水浸泡普通的枪头，然后高压处理后使用（我每次使用前高压3次）；
2：玻璃制品要清洗干净后，再用双蒸水清洗2-3遍，然后在180度烘烤至少6小时，烘烤前塑料盖子不能放进去，所有瓶子的瓶口要用锡箔纸盖好；
3.提取RNA时你的所有试剂，用品都要在一个干净的环境中进行，建议在超净台里操作，离心前离心机要提前打开，所有操作都要勤换手套，带口罩；
4。电泳使用的电泳槽、梳子，制胶板等要用3%的双氧水处理至少半小时或用0.5%的氢氧化钠溶液浸泡过夜，然后用高压后的0.1%DEPC水清洗干净再用；
5.所有试液的配制要全部使用高压后的0.1%的DEPC水溶液配制。
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23楼2012-03-15 12:38:44
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忆-雪

银虫 (小有名气)
我提出来的RNA电泳图5S、18S、18S三条带全部都有，但我不知道该怎样上传给你看看图
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24楼2012-03-15 12:41:53
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lilyjimei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-14 17:08:55:
是的，因为是厌氧菌，长的特别慢，所以biomass很少，又不能取太多样，怕影响反应器运行。你说marker不清晰条带未分开可能是胶的问题，是说我的胶浓度不合适还是其它什么原因？

是的，marker不清晰条带未分开可能就是胶浓度问题（我的是1-1.5%）或胶跑的时间短了些~~另外拍照的也可以调下试试~~
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25楼2012-03-15 13:32:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
内容已删除
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26楼2012-03-15 14:24:15
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑RNA最得小心了，实验过程中用到的试剂都要是无RNase的，枪头，电泳液，电泳槽，板子什么的都要处理好，不然的话降解很快而且很严重的哦
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27楼2012-03-15 14:33:58
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 回帖置顶 2012-03-15 21:56:45
西瓜: 金币+1, 给楼主参考~ 2012-03-15 21:57:07
无图无真相
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
28楼2012-03-15 16:40:27
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-14 17:14:14:
我之前也是嫌处理槽子麻烦，所以就直接逆转录，再对cDNA进行PCR检测。但后来我们老师说好的RNA质量是做逆转录及后面一系列实验的必需条件，而且如果只是简单的看一下RNA质量不需要那么麻烦的处理电泳槽。

如果条件允许，你就收拾一套电泳用具，专门跑RNA使用（我们都是共用达不到这个要求），而且用250V跑5Min 试试 再不行就跑变性电泳吧  试剂的话国产公司都有得卖
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
29楼2012-03-15 21:07:24
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-03-15 16:40:27:
无图无真相

be/08/243823_1331800805_138.jpg

图不用说，很帅，最下面颜色暗暗的，能否解释一下什么情况么
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
30楼2012-03-15 21:09:33
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