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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA电泳
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳

各位，我的RNA电泳结果很差，是降解了吗？（最左边是生工的100bp DNA ladder）我是刚提完就跑的电泳，是提取过程中操作不当吗？

RNA电泳
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1楼 2012-03-12 10:20:29
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忆-雪

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-15 13:33:04
1：你可以买RNase-free的枪头，EP管，或者自己用0.1%DEPC水浸泡普通的枪头，然后高压处理后使用（我每次使用前高压3次）；
2：玻璃制品要清洗干净后，再用双蒸水清洗2-3遍，然后在180度烘烤至少6小时，烘烤前塑料盖子不能放进去，所有瓶子的瓶口要用锡箔纸盖好；
3.提取RNA时你的所有试剂，用品都要在一个干净的环境中进行，建议在超净台里操作，离心前离心机要提前打开，所有操作都要勤换手套，带口罩；
4。电泳使用的电泳槽、梳子，制胶板等要用3%的双氧水处理至少半小时或用0.5%的氢氧化钠溶液浸泡过夜，然后用高压后的0.1%DEPC水清洗干净再用；
5.所有试液的配制要全部使用高压后的0.1%的DEPC水溶液配制。
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23楼2012-03-15 12:38:44
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei(金币+2): 2012-03-12 20:05:20
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带，28s的带的亮度约是18s带的两倍，最低也得等同，一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了，建议认真彻底处理提取用具及环境！
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坚持就是胜利
2楼2012-03-12 12:29:14
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-03-12 12:29:14:
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带，28s的带的亮度约是18s带的两倍，最低也得等同，一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了，建议认真彻底处理提取用具及环境！

我提取用的枪头是买的一次性的，实验台和移液枪都喷了酒精了，实验过程中都带着口罩和干净手套，求教还有哪里可能没注意到啊？急！急！急！
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3楼2012-03-12 15:00:57
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-03-13 10:30:25
mahoumeimei: 金币+1 2012-03-27 11:28:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-12 15:00:57:
我提取用的枪头是买的一次性的，实验台和移液枪都喷了酒精了，实验过程中都带着口罩和干净手套，求教还有哪里可能没注意到啊？急！急！急！

跑电泳的东西也是要处理的。我以前是用试剂盒提取的，所用的管子和枪头也都是买的去RNase的，把制胶的模具和电泳槽用DEPC处理，提取过程尽量迅速，效果还是不错的。你是提取的甚么的RNA呢？
    祝实验成功！
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坚持就是胜利
4楼2012-03-12 17:08:26
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