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jamy1989木虫 (小有名气)
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信号分子
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| 现在从链霉菌中表达出了一种调控蛋白并提纯了，通过验证这种调控蛋白能和基因 D结合，结合后能调节该菌株次级代谢产物的产生，但这种结合必须是在加培养液上清的条件下！所以上清中必然存在着某种信号分子，那么，现在要找到这种信号分子有什么好的方法吗？ |
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【答案】应助回帖
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西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 厉害！ 2012-05-20 18:37:56
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 厉害！ 2012-05-20 18:37:56
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更正一下： 你现在已知的蛋白质是在细胞里结合DNA的基因D，很可能是个转录因子，那么用上贴的招数就不对了，那招用于产生第二信使的膜蛋白质。但是办法可以借鉴，你可以用结合基因D的那种蛋白质（假定为蛋白质X）作为诱饵固定在层析柱上，用产生目的信号的细胞粉碎后过柱，看蛋白质X与那些成分结合（假设蛋白质X结合的特定蛋白质叫蛋白质Y），然后洗脱，即Pull-down,进一步用蛋白质-蛋白质相互作用方法研究两者的相互作用，最简单的是直接用电镜观察或者用原子力显微镜观察，或者用红外紫外荧光光谱分别测定两者游离时和混合均匀静置后的光谱变化，如果有专门软件可以用于解析出蛋白质X与蛋白质Y结合前后的二级结构变化，如果要精细些，也可以用NMR解析出蛋白质X与蛋白质Y结合前后的结构及其变化。如此再用蛋白质Y作为bait去钓取更靠近细胞膜或者就在膜上的与蛋白质Y相互作用的蛋白质，直到建立起完整的信号通路。 |
17楼2012-05-19 21:15:03
西瓜
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帮顶下~ 2楼2012-03-17 14:35:23
a731705125
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jamy1989
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