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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐,出来两个蛋白峰是怎么回事?所有的蛋白不是应该一起下来吗?所谓“盐峰”是什么?我要的产物在第一个峰,第二个峰活性很低。另外,请问脱盐的时候,用什么尺寸的柱子为好?是细长一些的还是粗短一些的?26X20cm柱子怎么样?我样品一般有十几毫升。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
29楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-23 09:45:24
大侠,我现在真的很疑惑,做个总蛋白别人一直很质疑,纯度的问题,我用水透析损失量太大了,有沉淀,沉淀中还含蛋白,得到的蛋白量很少。用PBS透析的话,PBS又在里面,纯度又不好测,很疑惑。老师又说蛋白里可能还 ...

你是提取什么样品的总蛋白质?这个样品具体怎样得来?怎样提取的?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
30楼2013-11-23 14:54:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
32楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-25 11:50:34
PBS提取,硫酸铵沉淀,再用PBS复溶,透析除盐,G25除小分子,冻干成粉,测冻干粉里的蛋白纯度...

G25可以同时去除小分子的,包括硫酸铵。硫酸铵是会造成一些蛋白质变性的,在我尝试纯化的10个蛋白质中,就有2个是不耐硫酸铵的。如果你不需要3KD以下的寡肽,你可以超滤提取。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
33楼2013-11-25 18:56:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
34楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-28 10:21:42
我现在最担心的就是用G25除小分子会把所有的盐除去,总蛋白中没有缓冲盐会不稳定...

只能是尝试了
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35楼2013-11-28 13:02:54
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