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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐，出来两个蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是应该一起下来吗？所谓“盐峰”是什么？我要的产物在第一个峰，第二个峰活性很低。另外，请问脱盐的时候，用什么尺寸的柱子为好？是细长一些的还是粗短一些的？26X20cm柱子怎么样？我样品一般有十几毫升。
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1楼 2012-03-05 15:46:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
29楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-23 09:45:24
大侠，我现在真的很疑惑，做个总蛋白别人一直很质疑，纯度的问题，我用水透析损失量太大了，有沉淀，沉淀中还含蛋白，得到的蛋白量很少。用PBS透析的话，PBS又在里面，纯度又不好测，很疑惑。老师又说蛋白里可能还 ...

你是提取什么样品的总蛋白质？这个样品具体怎样得来？怎样提取的？
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30楼2013-11-23 14:54:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
32楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-25 11:50:34
PBS提取，硫酸铵沉淀，再用PBS复溶，透析除盐，G25除小分子，冻干成粉，测冻干粉里的蛋白纯度...

G25可以同时去除小分子的，包括硫酸铵。硫酸铵是会造成一些蛋白质变性的，在我尝试纯化的10个蛋白质中，就有2个是不耐硫酸铵的。如果你不需要3KD以下的寡肽，你可以超滤提取。
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33楼2013-11-25 18:56:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
34楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-28 10:21:42
我现在最担心的就是用G25除小分子会把所有的盐除去，总蛋白中没有缓冲盐会不稳定...

只能是尝试了
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35楼2013-11-28 13:02:54
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