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镜花水月飞鱼

新虫 (小有名气)

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专业: 中药学其他科学问题

[求助] 薄层与硅胶柱层析的几个问题已有1人参与

我想分离黄芪中的黄酮类物质，采用的是硅胶柱层析先砍断粗粉。薄层选的展开剂时别人推荐的氯仿/甲醇。做了个6:1的，RF值分别为0.13,0.21,0.35,0.75。
1.我想用梯度洗脱，梯度开始的浓度是不是板上只有一个点，RF值为0.2左右时的展开剂比例就可以作为淋洗剂的起始比例啊？也就是把RF值0.75压到0.2时的比例。
2.我自己过了个小柱子试了试，柱子是2*20的，湿法装柱，干法上样1.3g。洗脱梯度为氯仿--氯仿：甲醇99:1---25:1---10:1--6:1，洗脱到25:1时还有分段，但到10:1时分段渐渐重合了。到6:1就好像一大滩没分离的原样品直接就下来了。而且柱子里的硅胶像被溶解了似的变得透明，到7:3时滴下的溶液就呈现浑浊现象了。所以我就终止了实验。。。
求解释。。。。求解决。。。

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人生是快乐的！应该！

1楼 2012-03-04 11:27:45

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引用回帖:

楼: Originally posted by timichael at 2012-03-05 17:56:02:
你极性升的太快了……应该用小极性（25/1）的多冲一会，拿到一个产物点之后再换极性大一点的洗脱剂。DCM和氯仿过柱子都会变透明的，甲醇含量多了会溶解一些硅胶。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。