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镜花水月飞鱼

新虫 (小有名气)

[求助] 薄层与硅胶柱层析的几个问题 已有1人参与

我想分离黄芪中的黄酮类物质,采用的是硅胶柱层析先砍断粗粉。薄层选的展开剂时别人推荐的氯仿/甲醇。做了个6:1的,RF值分别为0.13,0.21,0.35,0.75。
1.我想用梯度洗脱,梯度开始的浓度是不是板上只有一个点,RF值为0.2左右时的展开剂比例就可以作为淋洗剂的起始比例啊?也就是把RF值0.75压到0.2时的比例。
2.我自己过了个小柱子试了试,柱子是2*20的,湿法装柱,干法上样1.3g。洗脱梯度为氯仿--氯仿:甲醇99:1---25:1---10:1--6:1,洗脱到25:1时还有分段,但到10:1时分段渐渐重合了。到6:1就好像一大滩没分离的原样品直接就下来了。而且柱子里的硅胶像被溶解了似的变得透明,到7:3时滴下的溶液就呈现浑浊现象了。所以我就终止了实验。。。
求解释。。。。求解决。。。
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人生是快乐的!应该!
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shilei020145

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:15
梯度洗脱时,同一比例也应当分部收集,一般我以柱体积的一半收集,然后点板分析合并,多做点就有经验了!
4楼2012-03-04 20:08:07
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kobe杰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:04
你25:1可以时间长一点,得耐心,或者你用20:1先爬板试试能不能降到0.2或0.3左右,氯仿过柱子就是透明的,没有溶解,就是这样的
2楼2012-03-04 11:40:49
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xuewuhen2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:10
洗脱剂在25:1时有分层就可以慢慢的让它下来啊  收集不同的层液 点板看看会不会跑同一点  直到没的东西了再换极性
加油
3楼2012-03-04 13:47:40
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ysx555

金虫 (正式写手)

变透明不是溶解,是因为有氯仿
5楼2012-03-05 09:29:24
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