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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 薄层与硅胶柱层析的几个问题
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镜花水月飞鱼

新虫 (小有名气)

[求助] 薄层与硅胶柱层析的几个问题 已有1人参与

我想分离黄芪中的黄酮类物质，采用的是硅胶柱层析先砍断粗粉。薄层选的展开剂时别人推荐的氯仿/甲醇。做了个6:1的，RF值分别为0.13,0.21,0.35,0.75。
1.我想用梯度洗脱，梯度开始的浓度是不是板上只有一个点，RF值为0.2左右时的展开剂比例就可以作为淋洗剂的起始比例啊？也就是把RF值0.75压到0.2时的比例。
2.我自己过了个小柱子试了试，柱子是2*20的，湿法装柱，干法上样1.3g。洗脱梯度为氯仿--氯仿：甲醇99:1---25:1---10:1--6:1，洗脱到25:1时还有分段，但到10:1时分段渐渐重合了。到6:1就好像一大滩没分离的原样品直接就下来了。而且柱子里的硅胶像被溶解了似的变得透明，到7:3时滴下的溶液就呈现浑浊现象了。所以我就终止了实验。。。
求解释。。。。求解决。。。
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人生是快乐的！应该！
1楼 2012-03-04 11:27:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

timichael

铁杆木虫 (正式写手)

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★
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karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-04-16 01:40:30
你极性升的太快了……应该用小极性（25/1）的多冲一会，拿到一个产物点之后再换极性大一点的洗脱剂。DCM和氯仿过柱子都会变透明的，甲醇含量多了会溶解一些硅胶。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。
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爱一个人，最好拿一辈子的时间
9楼2012-03-05 17:56:02
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米色的夏

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
leecius(金币+1): 谢谢帮助。 2012-03-06 08:19:06
还有，实验要坚持拿到结果的，别没结果就终止实验。嗯嗯，过柱子的时候多点点板，看板上的情况。
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我无法放下的是那心中孤独而高贵的骄傲
8楼2012-03-05 17:00:29
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lwsvoo7

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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karl2100: 金币+1, 3Q 2012-04-16 01:39:45
过柱子千万不能太急了，不一定是有东西下来就要增大极性。我曾经一根柱子跑了半年，从氯仿到氯仿甲醇500：1就跑了两个星期。结果这一根柱子下来八个化合物。其他的组分用制备板纯化一下就差不多拿到可能打谱了。三萜都可能用硅胶柱拿到的。不要急，慢慢来
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12楼2012-03-06 13:20:36
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普通回帖

kobe杰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:04
你25:1可以时间长一点，得耐心，或者你用20：1先爬板试试能不能降到0.2或0.3左右，氯仿过柱子就是透明的，没有溶解，就是这样的
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2楼2012-03-04 11:40:49
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xuewuhen2011

银虫 (小有名气)

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xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:10
洗脱剂在25:1时有分层就可以慢慢的让它下来啊  收集不同的层液 点板看看会不会跑同一点  直到没的东西了再换极性
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加油
3楼2012-03-04 13:47:40
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shilei020145

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-03-04 22:13:15
梯度洗脱时，同一比例也应当分部收集，一般我以柱体积的一半收集，然后点板分析合并，多做点就有经验了！
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4楼2012-03-04 20:08:07
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ysx555

金虫 (正式写手)
变透明不是溶解，是因为有氯仿
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5楼2012-03-05 09:29:24
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镜花水月飞鱼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kobe杰 at 2012-03-04 11:40:49:
你25:1可以时间长一点，得耐心，或者你用20：1先爬板试试能不能降到0.2或0.3左右，氯仿过柱子就是透明的，没有溶解，就是这样的

谢谢。那我选择洗脱剂的方法是对的吗？以下是我过柱子的照片，
。中间部分那一块一开始是显示分层的，从25:1到10:1再到6:1的时候分层就不见了。都聚集到一块了，然后就全一块洗脱下来了。。
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人生是快乐的！应该！
6楼2012-03-05 15:00:46
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米色的夏

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你极性升的太快了……所以会一起洗下来。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。
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镜花水月飞鱼
我无法放下的是那心中孤独而高贵的骄傲
7楼2012-03-05 16:58:02
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镜花水月飞鱼

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 米色的夏 at 2012-03-05 16:58:02:
你极性升的太快了……所以会一起洗下来。过柱子不能急，看情况慢慢加极性。

谢谢你哦。。。我打算重新过一下柱子。。到时候再请教你
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人生是快乐的！应该！
10楼2012-03-06 08:17:41
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