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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 双酶切

我的片段与质粒连接后,转到DH5α中,后提质粒,进行双酶切验证,和PCR验证,PCR能出现目的条带,可是双酶切切不来是怎么回事呢?不解,请大家多多指教啊
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yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by smilerion at 2012-02-28 23:45:27:
用基因引物和载体引物PCR验证不是更好么。。

是啊
9楼2012-02-29 20:42:48
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-02-28 08:15:54
你的阳性克隆多吗?
如果所有的阳性克隆都是这个样,那么有可能是PCR假阳性(PCR验证时有阴性对照吗?)
或者你的克隆方案是否有问题,导致酶切连接后酶切位点消失?
如果有更详细的信息,可以再分析

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-02-27 21:43:34
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2012-02-27 21:43:34:
你的阳性克隆多吗?
如果所有的阳性克隆都是这个样,那么有可能是PCR假阳性(PCR验证时有阴性对照吗?)
或者你的克隆方案是否有问题,导致酶切连接后酶切位点消失?
如果有更详细的信息,可以再分析

假阳性是经常出现的,所以多做几个吧,呵呵
3楼2012-02-28 08:16:42
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yeshui

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2012-02-27 21:43:34:
你的阳性克隆多吗?
如果所有的阳性克隆都是这个样,那么有可能是PCR假阳性(PCR验证时有阴性对照吗?)
或者你的克隆方案是否有问题,导致酶切连接后酶切位点消失?
如果有更详细的信息,可以再分析

转化的LB板上克隆很少,而且都是在边上长的,进行菌落PCR筛选都是阳性,但是再划到含有抗生素的LB板上大多数不长,只有一个长了,我上述做的就是长的那个。菌落PCR是用片段引物筛的
4楼2012-02-28 08:49:50
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