[交流] 影响HPLC分离度的各种因素，并说明如何提高分离度

影响HPLC分离度的各种因素，并说明如何提高分离度

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1楼2012-02-22 16:49:54

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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

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逃跑熊S(金币+1): 谢谢 2012-02-24 17:47:58

色谱柱、柱温、流动相组分（流动相的选择、极性、pH等）、梯度、流速等

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6楼2012-02-24 08:23:49

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rabit5522

木虫 (著名写手)

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逃跑熊S(金币+1): 谢谢啦~~ 2012-02-22 17:31:38

溶样溶剂，流动相，方法。。。。蛮多的。。
如何提高？没有通用方法，只能根据要分离的物质组成，选择合适的方法和溶剂。选个方法，试跑一下，然后根据试跑的结果，进行调整。

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2楼2012-02-22 17:11:26

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燕子飞镖

金虫 (正式写手)

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逃跑熊S(金币+1): 分离度：R=√n/4×(a-1)/a×k2/(1+k2)不是这个么？ 2012-02-22 17:34:13
soundhorizo(金币+1): 感谢专业指导 ^^ 欢迎常来 2012-02-22 18:06:59

分离度的公式是：
R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)
你可以通过加大两个保留时间之差再提高。
通过选择合适的固定相达到提高分离度的效果，同时在改变流动相组分比例也能提高分离效果。
2. 离子对试剂是其中的一个手段
3. 不同样品改变不同参数如改变PH值、换柱子、降低进样量、降低流速、柱温等具体问题具体分析
4. 改变洗脱剂的比例等
5. 增加柱温也是一个方面。
6. 看了大家的讨论，谈几点意见吧。
1）从理论上说可以通过降低塔板高度以及增加相对保留时间两个方面来实现。
2）在液相色谱实践中，色谱柱的分离效能虽然可以通过更换高效色谱柱、调整最佳流速等手段来控制，但更多情况下还是保留时间的调整更为来的方便。
3）改变相对保留时间（选择性）的常用手段至少包括：流动相配比、pH值、离子对试剂、柱温度等方面。这些要根据自己关注的难分离组分对的具体情况有选择的实施，所以，必须首先了解它们之间化学性质的差异，然后有针对地选择处理手段。
4）液相色谱分析的目标成分往往比较复杂，常涉及多种成分同时检测，所以在做分析条件的调整时必须同时兼顾所有主要成分色谱行为的变化，其中既包括目标成分，也包括共存的干扰成分。
所以，要想保证所有目标成分在任何样品中都能获得满意的分离度，这是一个十分富有挑战性的课题，即便一个经验十分丰富的色谱工作者同样也不敢轻视。
7. 我们常用的C18柱，一般载碳量高的固定相，分离效果要强一点。有时碰到分离效果不好时，多采用更换色谱柱（不同品牌）的方法，这样避免了再去摸索其他条件而耗费时间，能少改动尽量少该，方法定下了尽量不去动它

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3楼2012-02-22 17:31:43

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