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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 提高DNA连接效率操作问题
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blairJing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-26 21:31:05:
我曾经用氨基DNA接羧基磁珠，也是死都接不上去，不管是自己合成修饰的磁珠还是买的磁珠都不行。后来我用羧基DNA接氨基磁珠就接上去了，至今没找到原因。

你用羧基DNA连接氨基磁珠也用EDC/NHS活化了吗？我这边有人做磁珠，说氨基磁珠非特异性吸附比较强啊@！
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11楼2012-03-20 16:42:55
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blairJing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
水墨丹青: 金币+2, ★有帮助, 不好意思，才看到这是应助回帖，寥寥金币，感谢你的回复~ 2012-05-20 19:59:51
你是做分子信标吗？你那个介孔硅表面有可能空间位阻大吧，是FAM在介孔硅上还是DNA在介孔硅上啊，我也做分子信标，讨论一下啊
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12楼2012-03-20 16:52:24
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-24 14:32:58
水墨丹青: 金币+2, ★有帮助, 呵呵~多谢多谢！ 2012-05-20 19:58:31
建议你在微酸环境下用EDC/NHS活化羧基
然后在微碱条件下，用氨基取代
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
13楼2012-03-24 13:55:45
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magic6

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-26 21:31:05:
我曾经用氨基DNA接羧基磁珠，也是死都接不上去，不管是自己合成修饰的磁珠还是买的磁珠都不行。后来我用羧基DNA接氨基磁珠就接上去了，至今没找到原因。

用羧基DNA的话岂不是要活化DNA？这样操作会不会比较麻烦？
请问您连接的时候DNA和磁珠的用量比例是怎么确定的呢？
还有如何确证DNA已经连接到磁珠上了？
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14楼2012-03-27 15:34:18
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
呵呵、、欢迎围观~
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15楼2012-04-30 13:03:11
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by blairJing at 2012-03-20 16:52:24:
你是做分子信标吗？你那个介孔硅表面有可能空间位阻大吧，是FAM在介孔硅上还是DNA在介孔硅上啊，我也做分子信标，讨论一下啊

不是，我是做的aptamer，跟分子信标差不多啦~不过我现在aptamer接上去了，你的如何呢？
不过空间位阻应该不存在吧？我的表面除了修饰羧基基团没有别的啊，如果是因为羧基太多那应该更容易接上去不是。
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16楼2012-04-30 13:06:59
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by duruo at 2012-03-24 13:55:45:
建议你在微酸环境下用EDC/NHS活化羧基
然后在微碱条件下，用氨基取代

亲，我现在接上去了，直接pH=5.0，活化完了还是5.0buffer里面过夜，就接上去了
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17楼2012-04-30 13:07:56
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 水墨丹青 at 2012-04-30 13:07:56:
亲，我现在接上去了，直接pH=5.0，活化完了还是5.0buffer里面过夜，就接上去了

恭喜

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2012-04-30 17:06:36
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csbcook

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-26 21:31:05
我曾经用氨基DNA接羧基磁珠，也是死都接不上去，不管是自己合成修饰的磁珠还是买的磁珠都不行。后来我用羧基DNA接氨基磁珠就接上去了，至今没找到原因。

我也是啊，死活接不上，现在干脆不用了
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19楼2012-09-21 09:35:38
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shanxiaoyue

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-26 21:31:05
我曾经用氨基DNA接羧基磁珠，也是死都接不上去，不管是自己合成修饰的磁珠还是买的磁珠都不行。后来我用羧基DNA接氨基磁珠就接上去了，至今没找到原因。

同问：怎么知道已经接上去了呢？
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20楼2013-06-04 21:07:22
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