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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 提高DNA连接效率操作问题
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水墨丹青

木虫 (小有名气)

[求助] 提高DNA连接效率操作问题

之前做过ＤＮＡ的连接，用的是ＥＤＣ－ＮＨＳ体系，但是老是接不上去。所以想想各位请教请教~
我用的ＥＤＣ和ＮＨＳ的水溶液体系。体系的ＰＨ没有特意调，先加的ＥＤＣ，15min活化后加的ＮＨＳ，但是接完后计算连接效率才发现完全没有接上去，不知道各位能不能帮忙找找有什么问题。
如果有其他的高效率连接ＤＮＡ的连接方法，也还请大家多多指教。
以上~~
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1楼 2012-02-22 11:34:33
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by duruo at 2012-03-24 13:55:45:
建议你在微酸环境下用EDC/NHS活化羧基
然后在微碱条件下，用氨基取代

亲，我现在接上去了，直接pH=5.0，活化完了还是5.0buffer里面过夜，就接上去了
赞一下 回复此楼
17楼2012-04-30 13:07:56
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772968930

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水墨丹青(金币+2): ★有帮助 呵呵。。好啊~posuidezhi@gmail.com或者1097429205@qq.com，还请你发到我的邮箱咯~~谢谢啦！ 2012-02-25 00:35:02
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-25 08:54:02
我也在感叹啊，文献上的不可信啊
不过我可以给你点文献，你试一试
赞一下 回复此楼
一心向着太阳
2楼2012-02-22 12:44:31
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hcswj

木虫 (小有名气)
你的DNA带什么基团？连接到什么基质上？
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启程
3楼2012-02-23 10:30:57
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hcswj

木虫 (小有名气)
还有你用的什么方法验证没有接上？
赞一下 回复此楼
启程
4楼2012-02-23 10:35:36
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