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weili100

新虫 (小有名气)

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[求助] DNA合成单如何解读？请教！

图片给出了DNA合成单：
想了解ug per OD 和 nmols per OD 的量是怎么计算的？
DNA修饰后还能不能用260nm波长的吸光度进行DNA的定量的分析？修饰后的基团如果在该区域没有是不是就可以。浓度怎么计算？
请教高手！！！

DNA 合成单

[ Last edited by weili100 on 2012-2-21 at 10:10 ]

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1楼 2012-02-21 09:20:32

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liubing7100

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
weili100(金币+3): ★有帮助 2012-02-25 13:22:15

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出母液的OD值。
举例：您拿到一管干粉的DNA，用1ml水溶解成母液，取该母液50μL稀释成1ml并在1ml标准比色杯中测定的吸光度为0.25，说明该50μL中含有0.25OD的DNA，也即说明原来1ml母液中含有5OD的DNA
你说的ug per OD 和 nmols per OD 的量计算，用（8.4nmol/1000）*4500.90就是了。
OD值是测出来的，不同的DNA分子量不同，好像纯粹理论计算搞不出来。对于你的第二个问题：260nm是所有DNA的共有的吸收峰，修饰以后还能不能在这个波长下作检测，很难说的。修饰后有影响肯定不行，没有影响的话应该还可以，但是要考虑仔细了，我以前用DNA修饰纳米粒子作解链温度。