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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞稳定转染，质粒的设计
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susanuse

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by ixido at 2012-02-17 16:10:58:
1 除了楼上的方法外，楼主可以找一下pEGFP的载体，这个载体自身带有EGFP序列，并且可以在EGFPN端或者C端插入目的蛋白
2 这个问题不大明白，不知道楼主想要什么样的结果
3 筛选稳定细胞系，这个取决于你真核细胞 ...

非常感谢你的帮助。
我的目的是想让我的蛋白表达的时候能带有GFP，蛋白量的多少倒是无所谓。因为我的蛋白不是一开始就表达的，要刺激之后有表达。我只是希望看到有表达就行了，就是有或无的一个定性指标。
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11楼2012-02-20 10:17:48
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susanuse

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by lder at 2012-02-18 08:46:01:
第一个问题：构建共表达载体，将GFP基因与目标蛋白基因连接到同一个载体中，置于同一个启动子下。从理论上将这样可以保证两个基因的协同表达，通过检测GFP的表达量来预测目标蛋白的表达量。但是从实际经验上讲，即 ...

非常感谢你的帮助，很详细，让我了解了不少。
我就希望我的蛋白表达的同时又GFP，如果GFP与我目的蛋白表达量不一致也没关系，我只希望有或者无定性就可以。
我想进一步问一下。关于稳定转染或者瞬时转染这个技术。我目前是小白水平，见谅哈~~~
是不是当我想增强某个基因表达，一般都是瞬时转染，转一个基因，然后看结果。而稳定转染，只能让细胞里没有的基因，转入，而后稳定表达，而不能让已有的基因增强表达？
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12楼2012-02-20 10:22:06
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丑牛1973

银虫 (初入文坛)
用pEGFP-N1载体，目的蛋白在细胞中表达的同时，同时表达GFP，在不表达目的蛋白时，不表达GFP。
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13楼2012-04-13 10:12:29
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wwei1987

新虫 (初入文坛)
正准备做，还一无所知，学习了
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14楼2013-02-21 11:12:22
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anning529

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
15楼2013-12-05 16:46:42
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头头的天空

铁虫 (初入文坛)
请问各位大虾，共转染制备假病毒的原理是什么样的？
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别因为走得太远而忘了为什么出发
16楼2016-03-04 11:26:36
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