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susanuse

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by ixido at 2012-02-17 16:10:58:
1 除了楼上的方法外,楼主可以找一下pEGFP的载体,这个载体自身带有EGFP序列,并且可以在EGFPN端或者C端插入目的蛋白
2 这个问题不大明白,不知道楼主想要什么样的结果
3 筛选稳定细胞系,这个取决于你真核细胞 ...

非常感谢你的帮助。
我的目的是想让我的蛋白表达的时候能带有GFP,蛋白量的多少倒是无所谓。因为我的蛋白不是一开始就表达的,要刺激之后有表达。我只是希望看到有表达就行了,就是有或无的一个定性指标。
11楼2012-02-20 10:17:48
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susanuse

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by lder at 2012-02-18 08:46:01:
第一个问题:构建共表达载体,将GFP基因与目标蛋白基因连接到同一个载体中,置于同一个启动子下。从理论上将这样可以保证两个基因的协同表达,通过检测GFP的表达量来预测目标蛋白的表达量。但是从实际经验上讲,即 ...

非常感谢你的帮助,很详细,让我了解了不少。
我就希望我的蛋白表达的同时又GFP,如果GFP与我目的蛋白表达量不一致也没关系,我只希望有或者无定性就可以。
我想进一步问一下。关于稳定转染或者瞬时转染这个技术。我目前是小白水平,见谅哈~~~
是不是当我想增强某个基因表达,一般都是瞬时转染,转一个基因,然后看结果。而稳定转染,只能让细胞里没有的基因,转入,而后稳定表达,而不能让已有的基因增强表达?
12楼2012-02-20 10:22:06
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丑牛1973

银虫 (初入文坛)

用pEGFP-N1载体,目的蛋白在细胞中表达的同时,同时表达GFP,在不表达目的蛋白时,不表达GFP。
13楼2012-04-13 10:12:29
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wwei1987

新虫 (初入文坛)

正准备做,还一无所知,学习了
14楼2013-02-21 11:12:22
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anning529

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

15楼2013-12-05 16:46:42
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头头的天空

铁虫 (初入文坛)

请问各位大虾,共转染制备假病毒的原理是什么样的?
别因为走得太远而忘了为什么出发
16楼2016-03-04 11:26:36
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