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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

[求助] 求助一个关于酿酒酵母转化的问题

最近在做DNA改组,想利用酿酒酵母作为表达载体,因为改组后的DNA需要筛选,需要建库,请问载体与目的基因连接后可以直接转化到酿酒酵母中进行筛选吗?如果可以,载体与目的基因加入连接酶连接过夜后,在转入酵母前需要做怎样的处理。怎样可以提高转化效率,用电转还是化转呢?
谢谢大家
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by lmxu0917 at 2012-02-16 17:25:33:
酵母转化效率低,用酵母转化建库的库容量会很小的。一般都是用大肠杆菌建好库后再转质粒进酵母细胞。
我没转过连接产物进酵母细胞。
酵母细胞的电转化有的需要将载体进行线性化。我当时转的质粒是附加型质粒,不 ...

我的基因不能在大肠中正常表达,所以只能酵母建库了,本来想用以前做的那个酵母,载体也是附加型质粒,不过因为表达蛋白需要半乳糖诱导,所以老师打算让我换一种酵母做,化转具体怎么做呢?
13楼2012-02-18 00:32:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电转比化转效率高这是肯定的。
2楼2012-02-16 07:54:08
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般酿酒酵母的表达载体都是穿梭载体,建库那一步为什么不在大肠杆菌里面做呢?肯定更容易操作一些。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-02-16 09:17:49
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-16 07:54:08:
电转比化转效率高这是肯定的。

酿酒酵母的电转怎么做呀?
4楼2012-02-16 10:18:32
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