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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 从骨髓中分离造血干细胞
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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[求助] 从骨髓中分离造血干细胞

小虫想从大鼠股骨的骨髓中分离出造血干细胞（或者有核细胞），进行RT-PCR。但不知道应该怎样分离？愁死我了……希望大家给点建议啊~~谢谢了！！！
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1楼2012-01-06 20:11:34
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ht_235

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 老实人sdu3375 at 2012-01-08 20:45:39:
我感觉我大鼠的骨髓中有些块状的东西，且较致密……不知道是什么？您看我这样进行操作行否？
1、用生理盐水将骨髓冲到离心管中，进行离心。3000r/min,10min.收集细胞，弃上清。
2、将收集的细胞用约2ml生理盐水 ...

这个转数，不同离心机有所不同，一般是400g的离心力，离心30min。你可以自己换算一下转数
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9楼2012-01-10 07:46:23
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ht_235

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用Ficoll液，密度梯度离心就可以了。吸取中间的白膜层，就是单个核细胞。如果只要造血干，就需要流式分选CD34细胞了，或者免疫磁珠分选，也是可以的。
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2楼2012-01-06 22:41:05
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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ht_235 at 2012-01-06 22:41:05:
用Ficoll液，密度梯度离心就可以了。吸取中间的白膜层，就是单个核细胞。如果只要造血干，就需要流式分选CD34细胞了，或者免疫磁珠分选，也是可以的。

谢谢您~我查资料看到，Ficoll液适用于分离单核细胞啊，不知道可不可以分离单个核细胞？谢谢啦~还有Percoll液是否也可以呢？
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3楼2012-01-07 13:06:46
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ht_235

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
老实人sdu3375(金币+5): 2012-03-10 14:11:09
ficoll分离的是单个核细胞，不是单核细胞。单核细胞也得流式分选CD14或者CD68阳性的才行，哪有那么简单分离单核细胞的方法啊。
ficoll和percoll都是可以的。
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4楼2012-01-08 08:47:17
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