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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何证明纳米粒子进入了细胞?
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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

[求助] 如何证明纳米粒子进入了细胞?

我们进行了约100nm左右的纳米粒子（荧光标记，绿色）进入细胞的实验。在细胞版培养好细胞，加入纳米粒子，几个小时之后对细胞膜（红色）、细胞核（蓝色）进行了染色。固定，共聚焦电镜下看出了细胞中有绿色粒子的存在，但是通过查看一些文献，有人提出无法确定粒子在细胞内还是细胞外，有可能是粘在细胞膜上，如何解决这个问题？

[ Last edited by 阳光西骑士 on 2012-1-6 at 15:40 ]
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1楼 2012-01-06 15:36:05
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nange9533

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
阳光西骑士(金币+1): 2012-01-08 21:12:31
激光共聚焦， AFM，以及通过在细胞外加荧光物质淬灭剂（淬灭剂不能进细胞），等
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4楼2012-01-07 19:18:24
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zrn_jane

木虫 (小有名气)
看你用的什么类型的材料了，一般可以用冷冻细胞切片看TEM，效果最好最直观；如果是金属纳米粒子可以反复洗涤洗涤后消解细胞测ICP-MS
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Theuniqueone
2楼2012-01-06 16:52:47
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zhanghai426

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
阳光西骑士(金币+2): ★★★很有帮助 2012-01-08 21:12:14
其实现在科学家对TEM和荧光证明纳米颗粒进入细胞的可靠性已经提出很多质疑，比如TEM，你不能确定看到的颗粒就是纳米颗粒，可能是细胞内的结构；再如荧光法，你不能确定看到的荧光点是纳米颗粒还是从纳米颗粒上释放的荧光染料，有文献用荧光漂白恢复技术（基于迁移率不同）来做补充证明，再如你提到的，看到的纳米颗粒可能只是吸附在细胞膜上，所以，最好用TEM和荧光共聚焦结合去证明，必要时还需借助其他方法作为佐证。
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3楼2012-01-07 15:40:52
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sansei_stone

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
阳光西骑士(金币+2): ★★★很有帮助 2012-01-08 21:12:38
阳光西骑士: 回帖置顶 2012-01-08 21:13:12
共聚焦的方法
做层扫描，在你想看的颗粒所在的位置做细胞截面
作出切面后进行观测
假如颗粒荧光更靠近切面的下半部分，那么就是在细胞里面
如果在在切面的上半部分，那基本上是在细胞表面了
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寻寻觅觅……
5楼2012-01-07 19:41:04
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