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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么我做禽流感H9型感染MDCK细胞不成功？
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bluenight108

铁虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我做禽流感H9型感染MDCK细胞不成功？

我现在在用MDCK细胞测H9型流感病毒的毒力（tcid50），我做ticd50时加了2ug/ml的胰酶，但没有任何细胞感染。听说是因为H9感染细胞效果不好，是不是做EID50效果好些？问一下大家其中是什么原因，最好有相关的文献，让我系统了解。谢谢
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1楼 2011-04-22 10:36:28
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-22 21:20:06
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:05:48
流感病毒感染细胞不能致使病变的情况很多，例如说细胞毒力太弱，病毒不够新鲜等。EID50和TCID50是两种不同的衡量指标，这个要看你是希望看细胞上效果呢，还是在鸡胚上的效果。因为很多后续的动物感染实验，有些就是用TCID50的100倍进行感染的。
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52187644
2楼2011-04-22 10:59:08
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bluenight108

铁虫 (初入文坛)
lstt09nk: 最好使用引用回复功能，这样，便于交流 2011-04-25 20:57:26
我主要是做病毒的杀灭效果，并不做后续的动物实验，所以重要的是准确性，稳定性，灵敏度。TCID50的一百倍感染时什么意思？例如一瓶T75的瓶子，我的病毒价是10-5，那我要这么加病毒？
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3楼2011-04-25 16:30:44
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 很热心~~ 2011-04-25 21:12:09
bluenight108(金币+1): 感谢！还有问题需要请教！ 2011-04-27 14:33:25
一般都是先测定好TCID50后，计算出具体数值，比如说10-8。他的一百倍就是10-6，也就是说病毒稀释10-6倍。不晓得你这个感染不成功是啥意思 是指没有病变么还是其他意思呢？如果要是细胞上无法病变，还不是可以在鸡胚上座，用EID50替代TCID50.
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52187644
4楼2011-04-25 20:57:48
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bluenight108

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-04-25 20:57:48:
一般都是先测定好TCID50后，计算出具体数值，比如说10-8。他的一百倍就是10-6，也就是说病毒稀释10-6倍。不晓得你这个感染不成功是啥意思 是指没有病变么还是其他意思呢？如果要是细胞上无法病变，还不是可以在鸡 ...

感染不成功就是说，接种病毒后没有病变。我过去做的都有病变，今年过来做的就没有了（我换了新分离的H9病毒）。我之前做的是TCID50，现在换EID50，那前面的岂不是没用了？
你说的10-8的病毒，应该是稀释到10-6次方倍接毒。那不同大小的瓶子接毒量应该怎么算呢？例如T75的细胞瓶，我应该接多少？然后需要加维持液多少？
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5楼2011-04-27 14:43:16
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 很不错哦~~ 2011-04-28 13:46:42
1.原来有现在没有了，说明病毒的感染能力不同啦。有些新出现或者是分离的AIV是感染细胞能力不强，这个很正常的。又不是同一个病毒原来感染，现在不感染了。
2.原来用TCID50的数据是应细胞能够被H9感染，现在无法感染了，可以在文章中写上0，然后用EID50代替，但是做同样实验的时候使用不同的毒那就有点不好制定标准了。也不能说前面数据没有用了，很多病毒在鸡胚上EID50很高，但是TCID50很低，也很多的呢，或者反着来的也有呢。不过一般鸡胚分离的病毒出现前者的概率大于后者。
3.这个TCID50和瓶子大小没有关系，只是一个病毒的相对毒力因素，只要是同一个瓶子里面出来的病毒，保存的时候没有出现病毒失活或者讲解的情况，那么TCID50可以认为是一样的，当然这是理想化的啦。T75的瓶子接多少这个要看你的病毒感染能力有多少，需要你用梯度实验证明的。
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52187644
6楼2011-04-27 21:48:46
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bluenight108

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-04-27 21:48:46:
1.原来有现在没有了，说明病毒的感染能力不同啦。有些新出现或者是分离的AIV是感染细胞能力不强，这个很正常的。又不是同一个病毒原来感染，现在不感染了。
2.原来用TCID50的数据是应细胞能够被H9感染，现在无法 ...

恩，现在有些明白了，谢谢你！！
那要增强病毒的感染细胞能力，是不是要在细胞上传个2-3代？但还有人说，在细胞上传代太多病毒会变弱（因为是非易感，所以变弱）。
还有就是具体的试验操作，接毒后是不是1-2h后换液？再细胞达到70%左右病变的时候收毒？
还是上次问你的最后一个问题，我现在的病毒测毒价是10-3，那我扩增病毒T75的瓶子加多少？
你说的“T75的瓶子接多少这个要看你的病毒感染能力有多少，需要你用梯度实验证明的。”这个梯度试验应该怎么做呢？
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7楼2011-05-07 08:47:45
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杀杀杀

银虫 (初入文坛)
我是第一次做病毒类实验的 ，请问这个MDCK细胞大概要多少钱啊 规格是什么样的  啊~  谢谢啦，还有 那个H1N1和H3N2的价格一般是多少啊 ？
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8楼2011-09-20 21:11:46
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